尿激酶型纤溶酶原激活因子受体高特异性核酸适体的筛选

摘要

目的：利用磁珠依赖的SELEX技术，体外筛选得到可以特异性识别尿激酶型纤溶酶原激活因子受体（uPAR）的核酸适体。
　　方法：体外合成含有87个碱基的随机脱氧核苷酸库，以uPAR蛋白和Ni-bead的耦联复合体uPAR-bead作为筛选靶标，Ni-bead作为反筛靶标，利用磁珠依赖SELEX技术筛选可以特异性结合uPAR的核酸适体。利用筛选得到的核酸适体分别与EGFR-bead、GPC3-bead、Thrombin-bead孵育检测核酸适体对蛋白的特异性结合性能。同时检测筛选得到的核酸适体与4株uPAR阳性细胞（U87、U251、SW480、A549）的富集情况。利用流式细胞分析法检测筛选进度以及核酸适体与各种靶标的富集情况。
　　结果：经过16轮的严格筛选得到一条特异性结合uPAR-bead和uPAR阳性细胞的核酸适体，被命名为DZ-u1，该核酸适体不与EGFR-bead、GPC3-bead、Thrombin-bead结合。
　　结论：利用磁珠依赖的SELEX技术筛选得到的核酸适体DZ-u1可以特异性的结合uPAR蛋白和uPAR阳性细胞，为核酸适体在uPAR阳性肿瘤的早期诊断、靶向治疗等领域的应用奠定了基础。

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第一章前言

1.1SELEX技术和核酸适体

1.2 uPA系统和肿瘤

1.2.1uPA系统

1.2.2 uPAR和肿瘤

第二章 尿激酶型纤溶酶原激活因子受体核酸适体的筛选

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.2.1 靶标uPAR-bead的耦联。

2.2.2uPAR-bead核酸适体的筛选

2.2.3 克隆和测序

2.2.4 流式细胞分析法

2.3 结果

2.3.1uPAR-bead耦联

2.3.2uPAR-bead核酸适体的筛选

2.3.3 克隆和测序

2.3.4结合亲和力测定

2.4 讨论

第三章 核酸适体DZ-U1 特异性结合靶标的表征

3.1 实验材料

3.2 试验方法

3.2.1 蛋白质的耦联

3.2.2细胞培养

3.2.3DZ-u1对蛋白的选择性

3.2.4DZ-u1对uPAR阳性细胞的识别

3.3 结果

3.3.1DZ-u1对蛋白的选择性

3.3.2DZ-U1对uPAR阳性细胞的结合

3.4 讨论

结论

参考文献

致谢

基于uPAR的肿瘤治疗研究进展