电化学传感技术检测胰腺癌特异性标记物：K-ras基因和胰蛋白酶

摘要

胰腺癌（pancreatic cancer，PC）是一种常见的高致死率消化道恶性肿瘤。大多数病人在确诊时已经属于中晚期胰腺癌，无法彻底治疗。研究表明，胰腺癌患者K-ras基因突变率达到90％以上，而且80%的胰腺癌患者外周血中胰蛋白酶水平会明显升高。因此，突变型K-ras基因和外周血中胰蛋白酶水平异常变化可以作为早期胰腺癌诊断的依据。
　　近年来，电化学生物传感技术迅速发展，在基因诊断、肿瘤标志物检测以及抗癌药物筛选等方面发挥着越来越重要的作用。本文结合胰腺癌的分子病理学特点，设计了用于早期胰腺癌诊断的电化学传感器。主要内容如下：
　　第一章构建基于E.coliDNA连接酶和AuNPs的电化学DNA传感器用于突变型K-ras基因检测
　　本章主要构建了一种基于E.coliDNA连接酶和AuNPs的电化学DNA传感器，以RuHe x为信号指示体系，通过计时库仑分析法检测突变型K-ras基因。利用SEM和UV-VIS对合成的AuNPs和纳米金探针进行表征，采用EIS技术表征传感器制作过程。在最佳实验条件下，测得突变型K-ras基因的线性范围为0.1 pM~1000pM，LOD为10fM，并能在含有野生型K-ras基因的杂合体系中准确检测突变型K-ras基因。
　　第二章构建基于DNA聚合酶Ⅰ的电化学DNA传感器用于突变型K-ras基因检测
　　本章主要设计了一种基于DN A聚合酶Ⅰ的电化学 DN A传感器，通过基因杂交、聚合酶Ⅰ的链接作用和生物素-亲和素系统将HRP固定在修饰电极表面，在TM B检测体系中利用电流时间曲线技术精确测定突变型K-ras基因。主要通过EIS对传感器制作过程进行表征。在最佳实验条件下，测得突变型K-ras基因的线性范围为0.001 pM~100pM，LOD为0.5fM，优于目前用于K-ras基因测定的其他方法。本方法实现了在含有野生型K-ras基因的杂合体系中准确测定突变型K-ras基因，为临床检测突变型K-ras基因提供了一种新方法。
　　第三章构建基于聚硫堇-AuNPs复合材料为信号指示的免标记型电化学免疫传感器用于胰蛋白酶检测
　　本章主要建立了一种以聚硫堇-AuNPs复合材料（PTh-AuNPs）为信号指示的免标记型电化学免疫传感器，在 pH5.5的 PBS中，根据抗原—抗体反应固定抗原，通过差分脉冲伏安法精确测定胰蛋白酶。采用UV-VIS、TEM和XRD对PTh-AuNPs复合材料进行表征，以及通过AFM对传感器制备过程进行表征。在最佳实验条件下，测得胰蛋白酶的线性范围为0.02ng/ml~20ng/ml， LOD为0.01ng/ml。检测不同胰腺病患者血清中胰蛋白酶的结果，与 ELISA检测结果的相对偏差绝对值小于9.0%，结果令人满意，可以用于血清中胰蛋白酶的测定。

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Abstract

前言

参考文献

第一章 构建基于E.coli DNA连接酶和AuNP s的电化学DNA传感器用于突变型K-ras基因检测

引言

1.1 实验仪器与试剂

1.2 实验部分

1.3 结果与讨论

1.4 结论

参考文献

第二章 构建基于DNA聚合酶Ⅰ的电化学DNA传感器用于突变型K-ras基因检测

引言

2.1 实验仪器与试剂

2.2 实验部分

2.3 结果与讨论

2.4 结论

参考文献

第三章 构建基于聚硫堇-AuNP s复合材料为信号体系的免标记型电化学免疫传感器用于胰蛋白酶的检测

引言

3.1 实验仪器与试剂

3.2 实验部分

3.3 结果与讨论

3.4 结论

参考文献

结论

综述

参考文献

附录

致谢