一种新型化学损伤性大鼠肝纤维化模型的建立

摘要

一、二甲基甲酰胺致急性肝衰竭的临床与病理特点 目的：探讨总结二甲基甲酰胺（DMF）中毒致急性肝衰竭的临床与病理特点。 方法：以一例DMF中毒所致急性肝衰竭患者为研究对象，通过病史及入院后的临床观察分析总结患者的临床特点，通过影像学检查和肝活检病理分析 DMF中毒所致肝衰竭的病理特点。 结果：1. DMF中毒致急性肝衰竭全身症状重，肝性脑病出现早，持续时间长；凝血功能障碍表现突出；肝功能恢复慢；2. DMF中毒致急性肝衰竭恢复期肝组织呈多型性损伤，病变分布不均，可形成特异性肝细胞岛，坏死后肝硬化发生较快。 结论：DMF中毒致急性肝衰竭具有独特的临床和病理特点。 二、二甲基甲酰胺致大鼠肝纤维化模型的建立 目的：建立DMF诱导的化学损伤性大鼠肝纤维化模型，观察其病理特点；探讨DMF诱导大鼠肝纤维化模型的可行性，为中毒性肝损伤发病机制研究提供一种理想的动物模型。 方法：1.动物分组与模型制备：将66只SD大鼠随机分为3组：DMF组30只，腹腔注射40% DMF溶液1 ml/100g，每周1次；CCl4组30只，腹腔注射50%CCl4橄榄油溶液0.1 ml/100g，每周2次（d1、d4）；空白对照组6只，腹腔注射生理盐水溶液1 ml/100g，每周1次；三组均连续给药至第8周后停药。2.观察指标：每周称量给药前大鼠体重，观察给药后大鼠一般情况，分别于第1、4、6、8、12周给药2天后随机处死6只大鼠，对照组大鼠于第8w全部处死；检查腹腔内病变情况，留取肝脏进行病理切片 HE、网纤—Masson染色，观察肝组织病理学变化，采用Ishak评分系统、Laennec纤维化评分系统对炎症活动度、肝脏结构改变及纤维化程度进行分级评分。 结果： 1.一般情况：DMF组大鼠给药数分钟后很快出现精神萎靡不振，对外界刺激反应迟钝，活动度明显减弱，食欲明显下降，随着给药次数增加，上述反应有所减轻，持续时间缩短。CCl4组大鼠反应轻，持续时间短。空白对照组活动正常。 2.体重变化：DMF组与 CCl4组在给药后体重增加缓慢，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.001），DMF组较CCl4组更为明显（P＜0.001），且给药后第1周体重与造模前比较不增反降（t=3.676，P=0.001）。 3.死亡情况：DMF组分别在首次给药后36h、第4周、第7周各死亡1只，共3只；CCl4组第7周死亡2只，空白对照组无大鼠死亡； 4.腹腔内情况：DMF组首次给药2天后，腹腔内少量腹水，腹壁、肠管弥漫性充血，肠系膜散在小出血点；CCl4组仅表现为少量腹水；继续给药，DMF组肝脏包膜与周围胃肠管黏连加重，肠管胀气明显，晚期甚至出现麻痹性肠梗阻；而CCl4组病变较轻。空白对照组腹腔内无异常。 5.肝脏病理变化： 5.1.肝脏大体外观：DMF组与CCl4组第8周肝脏边缘圆钝，肝叶比例失调，表面呈花斑状，外覆白色包膜，质中，CCL4组肝脏外观病变更为明显，DMF组停药4周后部分大鼠肝脏表面可见明显大结节凸起，CCl4组无此改变。 5.2.急性期病理改变：DMF组肝细胞变性，淤胆，少有细胞坏死、凋亡；CCl4组肝细胞弥漫变性，3区中央静脉周围肝细胞点状坏死，凋亡。两组均可见到包膜下肝细胞带状水肿，气球样变，肝窦扩张淤血。 5.3.纤维化改变： 对照组大鼠肝组织结构正常； DMF组大鼠在第4周就可观察到汇管区少量纤维增生，继续给药纤维化程度加重，病变呈不均匀分布，纤维间隔纤细，肝小叶结构尚完整（Ishak分级不同时间点差异无统计学意义，χ2=6.156，P=0.104），肝细胞以变性为主，无明显炎症反应（不同时间点Ishak炎症活动度评分无明显差异，F=2.091，P=0.116）；停药4周后纤维化逆转（Laennec纤维化分级下降，u=2.502，P=0.012）。 CCL4组大鼠第4周小叶间纤维组织增生，凸显小叶轮廓，继续给药炎症反应加重（不同时间炎症活动度Ishak评分增加，P＜0.050），小叶结构明显改变（Ishak分级升高，P＜0.050），广泛形成假小叶，纤维间隔粗大。停药4周后纤维化明显逆转（Laennec纤维化分级下降，u=2.739，P=0.006）。 结论： 1. DMF可引起的亚急性中毒性肝损伤。所致肝损伤病变分布不均匀，靠近静脉周围肝细胞坏死较明显，尤其是大静脉周围更严重，伴炎症细胞浸润，其他部位病变相对较轻，肝小叶结构尚完整。 2.大鼠腹腔注射40% DMF溶液1ml/100g，6～8周后可出现肝纤维化；但纤维化病变不均匀，形成的纤维间隔纤细，停药后纤维化可以逆转。

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第一部分:二甲基甲酰胺致急性肝衰竭的临床与病理特点

前言

对象与方法

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分：二甲基甲酰胺致大鼠肝纤维化模型的建立

前言

材料与方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

综述:细胞外基质与肝纤维化

致谢