DHX32在结直肠癌中的表达与β-catenin、血管生成的相关性及其预后意义的研究

摘要

目的：
　　检测DHX32蛋白在结直肠癌细胞株中的表达水平；探究DHX32对人结肠癌细胞 SW480裸鼠移植瘤血管生成的影响；检测 DHX32在结直肠癌组织中的蛋白表达水平，探讨其与β-catenin、血管生成的相关性，DHX32与结直肠癌病理特征的关系及与结直肠癌患者预后的关系，为辅助结直肠癌临床诊断、治疗及预后评估提供新的线索。
　　方法:
　　1．采用四种细胞株，其中三株为人结直肠癌细胞（SW480、SW620和 DLD-1)，一株为正常结肠细胞（CCD-18Co），通过细胞爬片免疫组织化学法和细胞爬片免疫荧光法检测DHX32蛋白在四种细胞株中的表达情况。
　　2．制备裸鼠移植瘤组织标本，采用免疫组织化学方法，探究 DHX32对裸鼠移植瘤血管生成的影响（血管内皮采用CD31抗体进行标记，CD31是血管内皮标志物之一，CD31阳性数量反应血管生成情况）。
　　3．收集139例临床结直肠癌病理组织标本，采用免疫组织化学法，检测结肠癌组织中DHX32蛋白表达水平，同时进行β-catenin、CD31免疫组织化学染色，检测β-catenin和血管生成情况。
　　4．数值资料方差不齐用秩和检验进行两组独立样本统计，计算 P值；采用Spearman秩相关分析DHX32表达分别与β-catenin表达和CD31的相关性；采用X2检验和Logistic多因素回归分析研究DHX32与结直肠癌临床病理特征的关系；运用Log-rank检验分析结直肠癌组织中DHX32表达与患者预后的关系。
　　结果：
　　1．DHX32蛋白在结直肠癌细胞中表达升高。
　　2．干扰DHX32降低裸鼠移植瘤微血管密度。
　　3．DHX32、β-catenin和CD31在结直肠癌组织中表达均高于邻近癌旁组织。
　　4．DHX32在结直肠癌组织中的表达水平分别与β-catenin（r=0.515，P<0.001）、CD31（r=0.602，P<0.001）呈正向相关。
　　5．DHX32在结直肠癌组织中的表达水平与其分化程度有关，分化程度差的结肠癌组织中DHX32蛋白表达水平较高。
　　6．DHX32高表达的结直肠癌患者总生存期低于DHX32低表达的结直肠癌患者；DHX32高表达的结直肠癌患者无转移生存期低于 DHX32低表达的结直肠癌患者。
　　结论：
　　1．DHX32蛋白在结直肠癌细胞中表达升高。
　　2．干扰DHX32降低裸鼠移植瘤微血管密度。
　　3．DHX32在结直肠癌组织中高表达，并与β-catenin、CD31表达水平呈正向相关，且DHX32在分化差的结直肠癌组织中表达水平较高。另外，DHX32高表达的结直肠癌患者总生存期和无转移生存期均低于 DHX32低表达的结直肠癌患者。DHX32在结直肠癌组织中的异常表达可能与结直肠癌的发生发展密切相关，有望作为辅助结直肠癌临床诊断、治疗和预后评估的指标之一。

目录

声明

附录

引言

实验材料

1.研究对象

2.主要实验试剂

3.主要实验仪器和耗材

4、主要试剂配制

实验方法

1.细胞复苏

2.细胞培养及细胞爬片制备

3.细胞冻存

4.裸鼠移植瘤组织标本制备

5.临床结直肠癌病理标本制备

6.细胞爬片免疫组织化学染色

7.细胞爬片免疫荧光染色

8.石蜡切片免疫组织化学染色

9.随访

10.统计学处理

实验结果

一、DHX32在人结直肠癌细胞中的表达

二．DHX32对裸鼠移植瘤血管生成的影响

三．DHX32在结直肠癌组织中的表达及其预后意义

讨论

结论

参考文献

综述：Wnt/β-catenin信号通路与结直肠癌关系的研究进展

致谢