混合皮肤移植中自体角朊细胞通过B7-H1诱导转录因子GATA-3、p-STAT6及p-STAT3表达的相关研究

摘要

目的：
　　研究淋巴细胞上转录因子GATA-3、p-STAT6及p-STAT3在混合皮肤移植过程中的表达情况及其与自体角朊细胞和 B7-H1的关系，探讨混合皮肤移植的相关免疫抑制机理。
　　方法：
　　1.从KM乳鼠身上提取所需的角朊细胞、淋巴细胞及表皮细胞，运用免疫组化法检测所提取原代细胞的细胞质量。
　　2.对所提取的三种细胞进行共培养，构建混合皮肤移植模拟体系(MELC体系)。3.24、48小时后，分离混合培养体系中的贴壁细胞及淋巴细胞，收集贴壁细胞的总蛋白，通过Western-blot检测各MELC体系中B7-H1的表达。同时，提取淋巴细胞的总RNA,运用实时荧光定量PCR检测淋巴细胞上GATA-3、STAT6及STAT3三种转录因子及细胞因子IL-10的mRNA表达水平。
　　4.采用B7-H1单克隆抗体阻断的方法确认，MELC体系中淋巴细胞上GATA-3、STAT6及STAT3三种转录因子及细胞因子IL-10的表达升高是否为B7-H1所诱导。
　　结果：
　　1.提取的三种原代细胞活性较高，体外培养稳定。免疫组化法检测原代细胞角蛋白抗体呈阳性，确为角朊细胞，符合实验要求。
　　2. Western-blot检测结果显示,经过24、48小时混合培养后，加入自体角朊细胞的实验组混合培养体系中,随着共培养时间的延长, B7-H1蛋白的表达升高。而不含自体角朊细胞的各对照组混合培养体系中，B7-H1则低表达。
　　3.实时荧光定量PCR检测结果显示，在MELC体系中混合培养24、48小时后，随着作用时间的增加,与不含自体角朊细胞的对照组 MELC体系相比,含有自体角朊细胞的实验组中,淋巴细胞上GATA-3、STAT6、STAT3三种转录因子及细胞因子IL-10的mRNA表达水平皆显著上升，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　4..实时荧光定量PCR检测结果显示，在MELC体系中混合培养24、48小时后，随着作用时间的增加，与未加入抗B7-H1单克隆抗体阻断的实验组MELC体系及加入了同源对照抗体的对照组MELC体系相比，在加入抗B7-H1单克隆抗体的阻断组MELC体系中，淋巴细胞上GATA-3、STAT6、STAT3三种转录因子及细胞因子IL-10 mRNA的相对表达量均呈降低趋势，差别有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：
　　在混合皮肤移植的过程中,自体角朊细胞可通过B7-H1分子促进淋巴细胞上GATA-3、p-STAT6及p-STAT3三种转录因子表达，继而负向调节免疫应答，最终诱导局部免疫抑制。

目录

声明

英文缩略词

前言

材料与方法

1.实验材料与试剂

2. 实验方法

3. 统计学处理

结果

1. 角朊细胞在倒置显微镜下的形态

2. 角朊细胞鉴定结果

3. 在混合培养体系中，含有自体角朊细胞的实验组B7-H1表达增高

4. 在混合培养体系中，含有自体角朊细胞的实验组，淋巴细胞上转录因子GATA-3及STAT6的mRNA表达增高。

5. 在混合培养体系中，含有自体角朊细胞的实验组，淋巴细胞上转录因子STAT3及细胞因子IL-10的mRNA表达增高。

7.加入抗B7-H1单克隆抗体进行阻断的MELC中，淋巴细胞上转录因子STAT3及细胞因子IL-10的mRNA相对表达量均降低。

讨论

1. 角朊细胞的免疫学特性

2.角朊细胞与混合皮肤移植

3. Th2细胞的分化与混合皮肤移植

4.IL-10/STAT3与混合皮肤移植

5. B7-H1对GATA-3、p-STAT3及p-STAT6三种转录因子的影响

6.小结

结论

参考文献

综述：混合皮肤移植中CD4+T细胞亚群的免疫抑制功能研究进展

致谢

硕士期间发表的论文