脂肪型脂肪酸结合蛋白在肝细胞癌发生发展中的功能和机制研究

摘要

背景及目的：
　　原发性肝细胞癌（以下简称肝癌）是最常见的恶性肿瘤之一，居全球恶性肿瘤发病率第五，肝癌恶性程度极高，在所有肿瘤中死亡率约占第三位。越来越多的证据揭示肝癌的发生与多基因突变相关，然而肝癌的发病机制目前仍然不明确。在肝癌的发生发展过程中，原癌基因的激活及抑癌基因的失活起到了重要的作用，在当今精准医疗的发展模式下，针对肝癌不同的基因突变给予相应的靶向治疗逐渐受到重视，尤其是对于晚期肝癌患者。
　　脂肪酸结合蛋白4（以下简称FABP4）是脂肪酸结合蛋白家族中的一员，属于脂肪型脂肪酸结合蛋白，其主要在巨噬细胞及脂肪细胞中表达，可特异性的结合脂肪酸受体，在肿瘤细胞的能量代谢中起着重要作用。现有的研究发现， FABP4与多种肿瘤的发生发展及生物学功能有着密切的关系，然而其在肝癌发生发展中的功能及机制尚不清楚。
　　方法：
　　1.收集64对肝癌及对应的癌旁组织，50对组织行Real-time PCR实验、14对组织行Western Blot实验分别检测mRNA水平和蛋白水平FABP4的表达。通过免疫组化实验检测175对肝癌及对应癌旁的组织芯片中 FABP4的表达情况；
　　2.通过χ2检验、t检验分析FABP4与肝癌患者临床病理特征之间的关系；
　　3.通过 Kaplan-Meier生存曲线分析 FABP4与肝癌患者无瘤生存期（Disease-free Survival，DFS）和总体生存时间（Overall Survival，OS）之间的关系，并进行Log-rank检验加以验证；
　　4.通过COX比例模型分析肝癌组织中FABP4表达水平是否为肝癌患者预后的独立危险因素；建立包含 FABP4外显子的 P23-FABP4质粒和表达 FABP4 siRNA的pLKO.1-puro质粒；转染质粒到肝癌细胞系中，通过流式分选及puro抗性分别筛选出稳定高表达FABP4（YY-8103,7404）及低表达FABP4的细胞系(MHCC-H,MHCC-L)；
　　5.通过MTT实验、结晶紫实验检测细胞的增殖能力； Boyden Chamber实验检测细胞的迁移能力；
　　6.通过裸鼠皮下荷瘤模型检测过表达FABP4后肝癌细胞的体内增殖能力；
　　7.提取过表达及低表达细胞的蛋白，利用 Western Blot实验分析常见增殖、转移信号通路蛋白的变化。
　　结果：
　　1.FABP4在肝癌组织中表达显著低于对应癌旁组织，并且FABP4的表达水平与部分临床病理特征之间存在着显著相关性；
　　2.FABP4低表达患者无瘤生存期（DFS）及总体生存期（OS）均小于FABP4高表达患者，且FABP4可以作为评判患者预后的独立危险因素；
　　3.在肝癌细胞系中过/低表达FABP4可以显著抑制/促进细胞的增殖及迁移能力；
　　4.在体内裸鼠皮下成瘤实验中我们发现，过表达FABP4可明显抑制肿瘤的增殖；
　　5.FABP4可能是通过下调snail蛋白的表达来抑制肝癌细胞的增殖及迁移能力；通过抑制STAT3的磷酸化来抑制肝癌细胞的增殖能力。
　　结论：
　　肝癌组织中FABP4的表达显著低于相对应癌旁组织，且FABP4可以作为判断肝癌病人术后无瘤生存期及总体生存期的独立风险因素。高表达 FABP4可以抑制肝癌细胞系的增殖及迁移能力，这可能与下调snail及p-STAT3的表达相关。这些结果预示着，FABP4可以作为一个肝癌新的潜在的治疗靶点。

目录

声明

附录

前言

材料与方法

（一）材料

（二）研究方法

第一部分：肝癌组织样本中FABP4的表达及与患者临床病理资料、预后之间的关系

1 结果

2 讨论

第二部分 FABP4在肝癌细胞中的功能及初步机制

1.结果

2 讨论

第三部分 FABP4抑制Snail表达及抑制STAT3磷酸化

1 结果

2 讨论

参考文献

综述：肿瘤细胞脂肪酸代谢的研究进展

在读期间发表的论文及科技成果

致谢