西红花玉米黄质裂解酶基因转化番茄的研究

摘要

本试验以浙杂905、圣亚和富丹为材料，对农杆菌介导的番茄遗传转化体系进行了系统的研究。主要结果如下： 1不同的种子消毒方式、种子培养基和番茄种子在培养基的不同放置方式是影响番茄种子萌发的主要因素。其中采用处理C(用70％的酒精消毒1 min.，然后用2％的次氯酸钠消毒10min.，无菌水冲洗3～5次)进行消毒，然后将番茄种子插入到培养基Ⅱ(1/2 MSBs+1％蔗糖+0.6％琼脂pH5.8)上时，有利于番茄种子的萌发，并且富丹种子的发芽率83.33％高于浙杂905种子的发芽率80.67％和圣亚种子的发芽率82.00％。 2以番茄子叶为外植体的最佳再生培养基配比为(MSB5+3％蔗糖+0.6％琼脂+BA2.0 mg/L+ NAA0.1 mg/L+ AgNO32.0 mg/L+ Vc100mg/L pH5.8)，浙杂905、圣亚、富丹子叶的出愈率分别为92.67％、95.67％、93.33％；以番茄茎段为外植体的最佳再生培养基配比为(MSB5+3％蔗糖+0.6％琼脂+BA2.0 mg/L+NAA0.2 mg/L+AgNO33.0 mg/L+Vc100mg/L pH5.8)浙杂905、圣亚、富丹茎段的出愈率分别为79.33％、81.33％、87.00％。 3番茄叶片外植体比茎段外植体对卡那霉素敏感，番茄子叶的适宜筛选浓度为50mg·L-1，番茄茎段的适宜筛选浓度为60mg·L-1；当头孢霉素浓度为500 mg·L-1时，可有效抑制农杆菌的生长。 4影响番茄子叶转化率的因素，依次是苗龄>预培养>菌液浓度>共培养>侵染时间。五种因子的最佳水平组合配比为苗龄8-9d、预培养2d、菌液浓度(OD600=0.6)、共培养3d、侵染时间20min.。影响番茄茎段转化率的因素，依次是预培养>菌液浓度>苗龄>共培养>侵染时间。五种因子的最佳水平组合配比为预培养3d、菌液浓度(OD600=0.6)、苗龄4-5d、共培养4d、侵染时间15min.。 5对再生植株经PCR检测证明CsZCD基因已成功整合到浙杂905和圣亚基因组中。

目录

文摘

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论文说明：缩略词表

声明

前言

1.番茄果实中类胡萝卜素

1.1西红花酸和番茄果实中玉米黄质代谢的研究

1.2西红花玉米黄质裂解酶(CsZCD)在西红花代谢途径中的作用

2.植物遗传转化概况

2.1土壤农杆菌转化系统

3影响农杆菌介导的番茄遗传转化系统转基因表达的主要因素

3.1基因调控序列的影响

3.2不同因素对植物遗传转化的影响

4本实验研究目的和意义

第一章番茄组织培养再生体系的建立

1材料和方法

1.1植物材料

1.2培养基与激素

1.3方法

1.4生物统计方法

2结果与分析

2.1种子无菌苗萌发条件的优化

2.2番茄组织培养丛生芽诱导率的影响因子

2.3不同激素及其浓度配比对丛生芽生根的影响

2.4移栽

3讨论

3.1番茄无菌苗萌发率的影响因素

3.2番茄愈伤组织分化及不定芽诱导的影响因素

3.3番茄外植体再生能力的影响因素

3.4 AgNO3对番茄茎段和叶片外植体不定芽的分化及伸长生长的影响

3.5抗坏血酸(Vc)对番茄茎段和叶片外植体再生能力的影响

4小结

第二章农杆菌介导的番茄遗传转化的研究

1.试验材料

1.1植物材料

1.2根癌农杆菌及质粒

1.3培养基

1.4供试菌株的准备和保存

2方法

2.1农杆菌的活化和培养

2.2抗生素敏感性测验

2.3转化方法

2.4正交试验设计

2.5抗性愈伤组织的分化

2.6抗性不定芽的生根

2.7转基因植株的PCR检测方法

2.8生物统计方法

3结果分析

3.1抑菌剂浓度的确定

3.2头孢霉素对番茄外植体分裂、分化的影响

3.3番茄外植体对卡那霉素敏感性

3.4极差分析

3.5抗性愈伤组织的分化

3.6抗性不定芽的生根

3.7转基因植株的PCR检测

4讨论

4.1抗生素对番茄外植体分裂、分化的影响

4.2正交试验设计

4.3番茄遗传转化效率的影响因素

4.4转基因植株的PCR检测

5小结

参考文献

版图和版图说明

致谢