香蕉枯萎病拮抗细菌的筛选及其利用研究

摘要

本文报道了两株香蕉枯萎病(Fusarium oxysporum f.sp.cubense race4)的拮抗细菌筛选及其利用研究，初步探究了两株拮抗细菌的防病效果、定殖情况、经不同处理后的酶活变化及BTSF菌株的促生作用及防病机理，对香蕉枯萎病的生物防治具有一定的实际参考价值。 从香蕉枯萎病病区健株香蕉中分离的26株细菌在室内平板拮抗测定中均具有拮抗活性，经初筛及不同方式复筛最终筛选出2株拮抗效果最好的菌株，编号分别为BTWC、BTSF。 通过不同时间接种处理室内的盆栽香蕉苗的防治试验，发现浇灌两菌株BTWC和BTSF的5×106 cfu/mL发酵液对防治香蕉枯萎病具有较好效果。接种病菌前3 d浇灌发酵液于香蕉苗根部，两株拮抗细菌的防效分别为72.49％、83.10％，而接种病菌后3 d再进行防治，BTWC和BTSF的防效已分别降至46.43％、38.77％，两菌株发酵液对香蕉盆栽苗的防效变化规律相似。其中，菌株BTSF的防效要好于菌株BTWC和50％多菌灵WP800倍液药剂的对照。初步推测拮抗菌的防病作用可能是因为先接种拮抗细菌后菌体占领了病原菌的侵入位点同时又可分泌抗菌物质，既可阻止病原菌的侵入又抑制了病原菌的生长，因而提高了防病效果。 用灌根法和涂抹叶片法接种拮抗细菌发酵液，不同时间取样，发现在植物的根茎叶中均可分离回收到抗 Rif400μg/mL的标记突变株，表明两菌株均能主动进入香蕉体内并在植株各个组织部位稳定定殖并进行繁殖、传导，这一结论为探讨拮抗菌对香蕉枯萎病的抗病性机制研究提供了理论依据。 分别采用愈创木酚氧化法、NBT光还原法等酶活性测定方法对灌根接种病菌悬浮液和拮抗细菌液的香蕉苗体内的POD、SOD、PAL、PPO等5种防御酶活性变化进行了研究，旨在探明香蕉抗枯萎病的作用机理以及拮抗细菌的诱导抗病机制。研究结果表明：经拮抗菌液处理后的5种防御酶的活性变化呈现一定的规律，其中，SOD活性较清水对照和仅接种病菌液处理的低，PAL、PPO、CAT、POD活性均比清水对照要高，说明香蕉苗经拮抗细菌液诱导处理后的防御酶活性普遍会升高。 将拮抗细菌BTSF菌株(经鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis)发酵液过滤离心去除菌体后添加不同量于香蕉的不同组织培养基中使含其体积分数为10％(VN)、20％(VN)、30％(V/V)，研究由此菌体产生的代谢物质对香蕉生长的影响。结果表明，BTSF菌株能产生对各种香蕉组培体具促生性的代谢物质，其能很好地提高诱导愈伤组织、增强丛生芽的分化和生根苗的生根作用，具有较好的香蕉生长促进作用。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章前 言

1拮抗细菌在植物病害防治中的研究进展

1.1拮抗细菌的种类

1.2拮抗细菌的抑制机制

1.3拮抗细菌在防治过程中存在的问题及解决办法

2香蕉枯萎病菌生物防治与抗病性研究

2.1香蕉枯萎病菌生物防治研究现状

2.2香蕉枯萎病的抗病性研究

3本研究的目的和意义

第二章香蕉枯萎病病菌分离、拮抗细菌的筛选与鉴定

1材料与方法

1.1供试病原菌的采集、分离

1.2拮抗细菌的分离、筛选与鉴定

1.3数据分析

2结果与分析

2.1病原菌的采集与分离

2.2拮抗细菌的分离、筛选与鉴定结果

第三章BTWC和BTSF菌株对室内盆栽香蕉苗的防治效果

1材料与方法

1.1供试材料

1.2试验方法

2结果与分析

第四章两株拮抗细菌在香蕉体内的定殖研究

1材料与方法

1.1供试材料

1.2试验方法

2结果与分析

2.1目标菌的抗利福平(Rif)标记

2.2抗利福平突变菌株分离回收结果

2.3抗Rif标记突变菌株的培养性状及对病原菌拮抗作用测定

2.4植株体内回收菌株鉴定结果

2.5标记菌株在植株体内的定殖与消长动态

第五章香蕉苗经拮抗菌处理后体内防御酶活性变化测定

1材料与方法

1.1供试菌株

1.2供试香蕉品种

1.3培养基

1.4试验所用仪器设备与器具

1.5试验所用主要试剂

1.6生防菌对香蕉苗的接种处理

1.7五种不同防御酶的活性测定方法

2结果与分析

2.1香蕉苗经拮抗菌处理后体内的5种防御酶活性变化结果

3讨论

第六章BTSF对香蕉外植体、丛生芽及生根苗的促生作用

1材料与方法

1.1供试材料

1.2香蕉的组织培养方法

1.3 BTSF菌株发酵滤液对香蕉的促生作用

2结果与分析

2.1 BTSF菌株发酵滤液对香蕉外植体诱导成芽的影响

2.2 BTSF菌株发酵滤液对香蕉丛生芽的增殖影响结果

2.3 BTSF菌株发酵滤液对香蕉生根苗的生根影响结果

3讨论

总 结

1主要研究结果

2特色与创新性

2.1拮抗细菌非挥发性代谢物质的拮抗活性测定

2.2拮抗细菌的诱导抗病性机理研究

2.3 BTSF菌株对香蕉的促生作用

参考文献

硕士期间发表的论文(专利)

致 谢