意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica)工蜂上颚腺10-HDA分泌规律及腺体蛋白研究

摘要

10-羟基-2-癸烯酸(10-hydroxy-2-decenoic acid,10-HDA)是蜂王浆非常重要的品质成分。蜜蜂工蜂的上颚腺是分泌10-HDA的唯一腺体,同时还能分泌信息素2-庚酮。近些年来,有关蜂王上颚腺以及信息素的研究较多,但对工蜂上颚腺中10-HDA的合成代谢机制还不清楚,为寻找工蜂上颚腺10-HDA合成相关蛋白,本研究对意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica)不同日龄工蜂上颚腺10-HDA的分泌规律及腺体蛋白进行了比较研究。
　　 通过反相高效液相色谱(RP-HPLC)的方法测定了不同日龄意蜂工蜂上颚腺中10-HDA的含量变化,结果发现,0日龄的意蜂工蜂上颚腺10-HDA含量极低,仅有7.03±2.98μg/bee,意蜂产浆群5日龄工蜂上颚腺的含量极显著升高(p＜0.01),达26.14+6.38μg/bee:10日龄的含量又比5日龄极显著升高(p＜0.01),达45.52±6.88μg/bee;10日龄、15日龄20日龄、25日龄无显著差异(p＞0.05),30日龄的含量极显著升高,达56.32±15.8μg/bee(p＜0.01)。意蜂非产浆群5日龄工蜂上颚腺10-HDA含量平均为36.67±.3.44μg/bee,与产浆群5日龄有极显著差异(p＜0.0001),含量高出10μg/bee左右,10日龄的含量显著升高(p＜0.01),达43.57±7.93μg/bee,与产浆群无显著差异(p＞0.05)。10日龄、15日龄、20日龄无显著差异(p＞0.05),10日龄、15日龄与产浆群无显著差异(p＞0.05),20日龄与产浆群显著差异(p＜05),25日龄的含量极显著升高(p＜0.01),达67.62±11.89μg/bee,与产浆群差异极显著(p＜0.01)。
　　 应用固相双向电泳技术比较了0日龄、5日龄、10日龄三个日龄段的意蜂工蜂上颚腺蛋白的差异。发现0日龄的蛋白表达点最多,0日龄与5日龄的定量表达差异蛋白点高达111个,上调2倍以上的有44个,下调2倍以上的有67个,表明两个日龄的上颚腺蛋白定量表达差异显著,这些差异与上颚腺生理功能的变化有关。由于0日龄上颚腺发育至5日龄、10日龄时,腺体代谢功能差异主要是以10-HDA为主的脂肪酸合成量的显著差异(如前段所述),因此,这些表达差异蛋白主要与10-HDA等脂肪酸的合成增加有关。0日龄至5日龄、5日龄至10日龄蛋白表达都上调的蛋白点有5个,其中SSP4005'(Mr=21.6kD,pI=5.90)差异显著且表达量最高。5日龄上颚腺和10日龄上颚腺的蛋白点无定性差异,但存在蛋白表达量的差异,也说明5日龄之后上颚腺表达的蛋白种类不变,主要通过蛋白表达量的变化来提高上颚腺10-HDA的合成量,本试验为以后寻找分泌10-HDA的关键蛋白点做了铺垫。