迟缓爱德华菌外膜蛋白的蛋白组学分析

摘要

迟缓爱德华菌是水产动物的主要致病菌，可导致多种淡水鱼和海洋鱼出现全身性出血性败血、皮肤肿胀腐烂、脏器的坏死等病征，造成大批量死亡，给水产养殖业带来巨大的经济损失。本研究试图发现迟缓爱德华菌的共同抗原，为迟缓爱德华亚单位疫苗的研发提供条件。
　　首先，本研究采用Sarkosyl法提取迟缓爱德华菌ET-202的外膜蛋白，利用双向电泳技术得到其外膜蛋白图谱，切取143个蛋白点进行质谱分析，共检测到66个蛋白点。通过Swiss.Prot在线数据库对这些蛋白点进行功能分析和亚细胞定位。从中发现5个与毒力相关的蛋白分别定位在分泌系统、细胞膜和外周胞质，12个与运输相关的外膜蛋白定位在细胞外膜，3个与抗菌素耐药性有关的蛋白定位在细胞内膜；并发现定位在细胞质中的一些与核酸、氨基酸、蛋白质、碳水化合物、脂类等代谢有关的蛋白。为迟缓爱德华菌的致病机制的研究提供了参考。
　　其次，为了找出不同来源菌株之间的共同抗原，用本实验室已制备的4种针对不同来源迟缓爱德华菌外膜蛋白的牙鲆抗血清对迟缓爱德华菌ET-202的OMPs2DE胶进行Western-blotting分析发现在50kDa-36kDa处有4个能被4种抗血清识别的蛋白，而对照组也出现这四个免疫反应点。为了进一步验证，我们又采集真鲷血清、石斑鱼血清和不同来源牙鲆血清进行Western-blotting分析，结果显示这些血清均可识别ET-202 OMPs50kDa-36kDa处的这四个蛋白。推测未免疫鱼受易感病原菌的侵染，而病原菌的抗原蛋白可能存在共同的抗原表位。
　　为了进一步研究不同病原菌的共同抗原。本实验利用双向电泳、Western-blotting和质谱技术对迟缓爱德华菌、嗜水气单胞菌、创伤弧菌和溶藻弧菌四种菌的外膜蛋白进行蛋白组学分析。四种菌的1D SDS-PAGE图显示在50kDa-36kDa之间有相似的条带，利用双向电泳技术的到其外膜蛋白的2DE图谱，并通过Western-blotting验证，其50kDa-36kDa之间均有能被同种抗血清共同识别的蛋白点，而同时未免疫的对照血清也识别这些蛋白。通过质谱分析嗜水气单胞菌和迟缓爱德华菌ET-202OMPs免疫蛋白点，发现有相似之处。说明两者可能存在共有的抗原，不同菌之间共同抗原的存在，为研制多种菌外膜蛋白的亚单位疫苗提供了可能。

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第一章 绪 论

1.1 研究背景

1.2 文献综述

第二章 细菌外膜蛋白的提纯与抗原性初步分析

2.1 前言

2.2 材料

2.3 方法

2.4 结果

2.5 讨论

第三章 细菌外膜蛋白的蛋白组学分析

3.1 前言

3.2 材料

3.3 外膜蛋白的双向电泳

3.4 结果

3.5 讨论

第四章 迟缓爱德华菌外膜蛋白的免疫蛋白组学分析

4.1 前言

4.2 材料

4.3 方法

4.4 结果

4.5 讨论

第五章 四种不同水产病原菌外膜蛋白的免疫蛋白组学研究

5.1 前言

5.2 材料

5.3 方法

5.4 结果

5.5 讨论

结 论

附 录

参考文献

攻读学位期间承担的科研任务与主要成果

致谢