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摘 要
关键词：嗜铬粒蛋白A，原核表达，单克隆抗体，免疫组化，免疫印迹
Abstract
英文缩写词表
第一章 文献综述
1.1 嗜铬粒蛋白A
1.1.1 嗜铬粒蛋白A的发现
1.1.2 嗜铬粒蛋白A
1.1.3 嗜铬粒蛋白A的生物学功能
1.2单克隆抗体技术
1.2.1单克隆抗体技术的发展
1.2.2 单克隆抗体的应用
1.3免疫组织化学
1.3.1 免疫组织化学的概况
1.3.2 免疫组织化学的应用
1.4 本课题的研究目的及意义
第二章 嗜铬粒蛋白A免疫原的制备
2.1 实验材料
2.1.1 质粒与菌株
2.1.2 合成引物
2.1.3 实验试剂
2.1.4 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.3 pET-28a-CgA表达载体的构建
组分
pUC57-CgA plasmid
2.2.4 诱导CgA菌株小样表达
2.2.5 CgA蛋白的表达与纯化
2.2.6 蛋白浓度测定
2.2.7 Western Blot验证目的蛋白
2.3 实验结果
2.3.1 抗原基因序列的选择与及密码子优化
2.3.2 优化序列的分析
2.3.3 pET28a-CgA 表达载体的构建
2.3.4 目的蛋白的表达、纯化及鉴定
2.3.5 蛋白浓度的测定
2.4 实验讨论
2.4.1 目的基因的优化
2.4.2目的蛋白的选择与鉴定
2.5 小结
第三章 分泌嗜铬粒蛋白A单克隆抗体杂交瘤细胞株的获得
3.1 实验材料
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验仪器
3.1.3 实验试剂
3.2 实验方法
3.2.1 小鼠免疫
3.2.2 小鼠血清效价测定
3.2.3 鼠骨髓瘤细胞的复苏及增殖
3.2.4 细胞融合
3.2.5 杂交瘤细胞的获得
3.2.6 试剂盒检测单克隆抗体的亚型
3.3 实验结果
3.3.1 小鼠血清效价的测定
3.3.2 融合前细胞的培养和观察
3.3.3 融合后细胞的培养与观察
3.3.4 杂交瘤细胞的筛选结果
3.3.5 细胞克隆化培养
3.3.6 单克隆抗体亚类鉴定
3.3.7 杂交瘤细胞染色体结果分析
3.4 实验讨论
3.4.1 单克隆抗体技术
3.4.2 佐剂的选择
3.4.3 细胞融合
3.4.4 杂交瘤细胞株的筛选
3.5 小结
第四章 嗜铬粒蛋白A单克隆抗体的性质鉴定与应用
4.1 实验材料
4.1.1 实验动物
4.1.2 实验仪器
4.1.3 实验试剂
4.2 实验方法
4.2.1 小鼠体内制备抗体
4.2.2 单克隆抗体的纯化
4.2.3 4E5抗体特异性检测
4.2.4 4E5单克隆抗体的识别肽段
4.2.5 CgA抗体纯化后的效价检测
4.2.6 抗体亲和力的测定
4.2.7 CgA抗体在免疫组化中的应用
4.2.8 抗体在免疫组化中稳定性的测定
4.3 实验结果
4.3.1 单克隆抗体的纯化结果及浓度测定
4.3.2 4E5抗体特异性的检测
4.3.3 4E5抗体识别表位的初步确定
4.3.4 抗体的效价测定
4.3.5 抗体的亲和力测定
4.3.6 4E5抗体在IHC中的应用
4.3.7 4E5抗体稳定性的测定
4.4 讨论
4.4.1 单克隆抗体的制备
4.4.2 抗体的纯化
4.4.3 4E5抗体识别表位的确定
4.4.4 抗体性质分析
4.4.5 4E5抗体在免疫组化上的应用
4.5 小结
第五章 全文总结与展望
5.1 全文总结
5.2 展望
参考文献
攻读学位期间的学术论文与研究成果
附录
致谢
