树突状细胞—肾癌786-0细胞株融合细胞在人免疫重建荷人肾癌SCID小鼠体内抗肾癌作用的实验研究

摘要

目的：建立具有人免疫学特性的荷人肾癌SCID小鼠模型，应用树突状细胞与肾癌786-O细胞株的融合细胞对其进行治疗，通过观察融合细胞在人免疫重建倚人肾癌SCID小鼠体内的抗肾癌作用，为DC融合疫苗治疗肾癌提供理论依据。 方法：第一部分：人免疫重建荷人肾癌SCID小鼠模型的建立及鉴定。将无免疫渗漏的SCID小鼠18只随机分为3组：背部皮下接种肾癌786-O细胞6只作为荷瘤组；腹腔注射健康成人外周血淋巴细胞6只作为人化组；腹腔注射人外周血淋巴细胞进行免疫重建，同时背部皮下接种肾癌786-O细胞6只作为人化荷瘤组。首先观察小鼠的生物学体征及皮下肿瘤组织的生长情况；其次通过ELISA实验测定小鼠血中人IgG蛋白的含量、利用流式细胞术检测小鼠血中人CD3+T淋巴细胞的比例：最后通过HE染色和免疫组织化学染色的方法检测小鼠脾脏和肿瘤组织中人CD3+T淋巴细胞的浸润情况。从生物学特性和免疫学特性两个方面对小鼠模型进行鉴定。第二部分：融合细胞在人免疫重建荷人肾癌SCID小鼠体内抗肾癌作用观察。从健康成人外周静脉血中获取单核细胞，利用细胞因子rhGM-CSF、rhIL-4和TNF-α联合作用诱导培养，获取DC；将其与肾癌786-O细胞经PEG诱导融合，通过贴壁培养方法获取较纯净的、生长状态良好的融合细胞。将18只人免疫重建荷人肾癌SCID小鼠随机分为3组：经尾静脉注射融合细胞6只作为融合细胞组、注射与肾癌786-O细胞混合培养的树突状细胞6只作为DC组、注射PBS液6只作为对照组。观察小鼠的生物学特性包括小鼠的生命体征及肿瘤组织的生长情况；利用流式细胞术检测肿瘤细胞周期的改变；HE染色观察肿瘤组织的病理学特点。 结果：第一部分：1.全部小鼠在6周内无死亡，荷瘤组和人化荷瘤组小鼠成瘤率均为100％，与荷瘤组比较人化荷瘤组小鼠成瘤潜伏期显著延长、肿瘤体积明显缩小(P＜0.01)。2.人化荷瘤组小鼠外周血中人IgG含量第2、4、6周分别为(394.86±16.70)ug/ml、(629.83±35.03)ug/ml、(994.96±70.11)ug/ml与人化组小鼠同期比较均有显著差异(P＜0.05)；第6周时人化荷瘤组小鼠外周血中人CD3+T淋巴细胞的比例为(12.31±0.86)％与人化组(9.02±0.64)％比较差异非常显著(p＜0.01)。3.HE染色和免疫组织化学染色检测证实人化荷瘤组小鼠肿瘤组织和脾脏中以及人化组小鼠的脾脏组织中存在人CD3+T淋巴细胞。第二部分：1.融合细胞组小鼠终末肿瘤组织体积为(257.12+7.01)mm3，与对照组(344.73+7.30)mm3比较差异非常显著(P＜0.01)。2.融合细胞组肿瘤细胞增殖指数为(25.04±3.55)，与对照组(66.74±3.89)比较差异非常显著(P＜0.01)。3.融合细胞组肿瘤组织与对照组比较显著出血、坏死，肿瘤组织内有大量淋巴细胞浸润。 结论：1.经腹腔注射人外周血淋巴细胞，背部皮下接种人肾癌细胞，成功建立了人免疫重建荷人肾癌SCID小鼠模型。2.人免疫重建荷人肾癌SCID小鼠模型能较好地模拟人肾癌的生物学特性，为肾癌免疫治疗的研究提供了理想的动物模型。3.融合细胞在人免疫重建荷人肾癌SCID小鼠体内应用，可以明显减慢肿瘤生长速度，抑制肿瘤细胞分裂增殖，可以激活更强的抗肿瘤免疫反应。

目录

论文说明：英汉缩略语名词对照

声明

摘要

前言

第一部分人免疫重建荷人肾癌SCID小鼠模型的建立及其鉴定

1材料和方法

2结果

3讨论

第二部分融合细胞在人免疫重建荷人肾癌SCID小鼠体内抗肾癌作用观察

1材料和方法

2结果

3讨论

全文结论

图 版

参考文献

文献综述1树突状细胞为基础的肾癌免疫治疗进展

文献综述2Hu-PBL-SCID小鼠及其在肿瘤免疫治疗研究中的应用

致 谢

攻读硕士学位期间撰写和发表的论文