超声激活血卟啉对人肝癌细胞株HepG2抗失巢凋亡能力的影响及其机制初探

摘要

目的：观察人肝癌细胞株 HepG2(Human hepatocellular carcinoma，cell)有无抗失巢凋亡能力；血卟啉经超声激活后对HepG2细胞抗失巢凋亡能力的影响，并探讨其可能机制。 方法：(1)以软琼脂集落形成实验观察HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞株HUVEC(Human umbilical vein endothelial cell)在失巢状态下的生长情况，琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测HepG2细胞和HUVEC细胞的失巢凋亡情况；(2)将HepG2细胞随机分为4组：①血卟啉组，培养液中加入浓度为1.5mg/ml的血卟啉溶液40μl后避光孵育30s；②超声辐照组，用1.0MHZ、1.5W/cm2超声辐照30s；③血卟啉+超声辐照组，加入相同剂量血卟啉溶液后避光孵育30s，予同等强度超声辐照30s；④空白对照组。各组处理后细胞以软琼脂集落形成实验观察其失巢生长情况，琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测其失巢凋亡情况；(3)在上述4组的基础上增设血卟啉+组氨酸+超声辐照组，加入浓度为50 μg/ml的组氨酸溶液31μl后同样方法予以血卟啉与超声联合处理。各组处理后细胞以紫外可见光分光光度计检测1，3-二苯基异苯并呋喃(1，3-diphenylisobenzofuran，DPBF)相对消耗量，流式细胞仪检测细胞凋亡率，逆转录 PCR 技术(RT-PCR)检测骨桥蛋白(osteopontin，OPN)的mRNA表达，蛋白质斑迹法(Western blot)检测OPN的蛋白表达。 结果：(1)倒置显微镜显示HepG2细胞在失巢状态下软琼脂中仍能生长，形成大小不等的细胞集落，而HUVEC细胞则无细胞集落形成，琼脂糖凝胶电泳显示HUVEC细胞出现了细胞凋亡特征性DNAladder，流式细胞仪检测结果显示HUVEC细胞的凋亡率明显高于HepG2细胞；(2)血卟啉+超声辐照组HepG2细胞在软琼脂中形成的细胞集落数明显少于其余3组，琼脂糖凝胶电泳出现细胞凋亡特征性DNA ladder，流式细胞仪结果显示其细胞凋亡率明显高于其余3组；(3)紫外可见光分光光度计和流式细胞仪结果显示血卟啉+超声辐照组的DPBF相对消耗量和细胞凋亡率明显高于其余4组，RT-PCR及Westernblot检测结果显示其HepG2细胞的OPN表达明显低于其余4组。 结论：(1)HepG2细胞在失巢状态仍然能够生长，具有抗失巢凋亡的能力。 (2)血卟啉经超声激活后能够抑制HtepG2细胞的抗失巢凋亡能力，使其发生失巢凋亡。 (3)血卟啉经超声激活后能够产生单线态氧，从而降低 HepG2细胞的OPN表达，可能是其抑制 HepG2 细胞抗失巢凋亡能力的重要机制之一。

目录

论文说明：英汉缩略语名词对照

声明

摘要

前言

第一部分人肝癌细胞株HepG2抗失巢凋亡特性的分析

1.材料和方法

2.结果

3.讨论

第二部分超声激活血卟啉对人肝癌细胞株HepG2抗失巢凋亡能力的影响

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

第三部分超声激活血卟啉抑制人肝癌细胞株HepG2抗失巢凋亡能力的机制初探

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

全文总结

参考文献

附 图

文献综述：声敏剂在肿瘤治疗中的研究现状与展望

致 谢

攻读学位期间发表的学术论文、参研项目及学术交流情况