党参总皂苷的提取纯化及对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用研究

摘要

目的:党参总皂苷(total saponins of Codonopsis,TSC)是党参中含有的一类重要生物活性物质,研究表明,党参总皂苷能防治实验性高脂血症,还具有抗肿瘤、抗菌等作用,具有很高的药用价值和开发前景。目前,国内对党参总皂苷的提取分离纯化工艺未见任何系统的报道。以党参为原料,对其提取、纯化工艺进行研究,探讨‘TSC对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用,为党参资源的进一步开发应用提供依据。
　　 方法:建立香草醛.高氯酸显色反应测定TSC的分光光度法；采用超声提取法与传统的冷浸法、加热回流提取法进行比较,以TSC的得率为指标,按L9(34)进行正交实验,对超声提取工艺进行优化；通过比较四种大孔吸附树脂(macroporous adsorption resin,MAR)的静态吸附量和解吸率,筛选出XAD-16型MAR.,以TSC的含量为指标,考察XAD-16树脂分离、纯化TSC的工艺条件；采用结晶法对TSC进一步纯化；通过测定三种模型组中肾组织的超氧化物岐化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、丙二醛(malonic dialdehyde,MDA)含量及肾小管上皮细胞凋亡指数(apoptosis index,AI),探讨TSC对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用。
　　 结果:采用香草醛-高氯酸比色法,测定波长为554nm,以人参皂苷Re为对照品,在3～200μg范围内对照品的量与吸光值呈良好的线性关系,相关系数为0.9996；方法回收率为98.25％,RSD为1.02％。实验结果表明超声提取最佳条件为:甲醇提取,料液比1:20,超声时间30min,超声次数3次,TSC的平均得率为6.60％。XAD-16型MAR对纯化TSC的动态吸附参数:上柱药液浓度5.00mg/mL、吸附流速2BV/h、径高比1:5、上样体积32mL；动态洗脱参数:先用5BV水洗糖类等水溶性杂质,再用5BV10％的甲醇洗涤,最后选用水饱和正丁醇进行洗脱,收集水饱和正丁醇洗脱部分；纯化后总皂苷含量明显比纯化前总皂苷含量高,精制率高达221.46％,且重现性好(RSD=1.0l％)。结晶法纯化TSC,纯度提高为40.73％。测定结果表明TSC使肾缺血再灌注损伤的肾组织SOD活性升高,MDA含量降低,肾小管上皮细胞AI明显减少。
　　 结论:本实验采用的提取、分离、纯化方法简单易行,提高了TSC的纯度；以Wister大鼠为动物实验模型,表明TSC对大鼠肾缺血再灌注损伤有明显的保护作用,为党参总皂苷的临床应用提供理论指导。