Hyper-IL-6重组慢病毒促肝细胞增殖及对大鼠急性肝衰竭保护作用的实验研究

摘要

本文研究了Hyper-IL-6重组慢病毒促肝细胞增殖及对大鼠急性肝衰竭保护作用。本研究分两部分：
　　 第一部分：
　　 目的：观察超级白细胞介素-6重组慢病毒对人正常肝细胞L-02的促增殖及保护作用。
　　 方法：利用已构建的超级白细胞介素-6重组慢病毒(FIV-HIL-6)、IL-6重组慢病毒(FIV-IL-6)和空慢病毒载体(FIV)分别感染人肝细胞L-02,采用流式细胞仪检测其对肝细胞L-02细胞周期及增殖核抗原的影响；并用ELISA法及实时荧光定量PCR技术法检测重组慢病毒感染L-02细胞后肝细胞磷脂酶A2含量及表达量的变化。
　　 结果：病毒颗粒感染L-02细胞后,FIV-HIL-6组对L-02细胞的促增殖作用显著高于其它对照组(p<0.01),且随着时间的延长,对细胞的促增殖作用有所增加,于感染后72h达到最高；FIV-HIL-6组的肝细胞胞浆型磷脂酶A2含量较其它对照组有显著降低(p<0.01),重组慢病毒的感染对L-02细胞的磷脂酶A2含量的影响没有明显的时间效应。另FIV-HIL-6组肝细胞磷脂酶A2mRNA的相对表达量较FIV组肝细胞降低。
　　 结论：FIV-HIL-6重组慢病毒对L-02细胞有较强的促增殖作用,并能明显降低肝细胞磷脂酶A2含量从而在炎症反应中起到保护肝细胞作用。
　　 第二部分：
　　 目的：探讨重组慢病毒介导的超级白细胞介素6(Hyper-IL-6)对大鼠急性肝衰竭的保护作用及机制。
　　 方法：45只D-氨基半乳糖急性肝衰竭模型大鼠随机分为3组:FIV-HIL-6组、FIV-IL-6组及未感染组,造模前2h分别给予腹腔注射FIV-HIL-6、FIV-IL-6和生理盐水,造模后12h,24h,48h,72h及7d时进行肝功能、内毒素、肝组织脂质过氧化水平(MDA、SOD)及光镜、电镜检查,并用逆转录PCR检测7d时肝组织目的基因整合状况。另取16只正常大鼠随机分为2组,分别给予FIV-HIL-6、FIV(空载体)一次性腹腔注射,观察重组慢病毒对大鼠的毒副作用。
　　 结果：FIV-HIL-6组血清谷丙/草转氨酶(ALT/AST)、总胆红素(TB)、内毒素、MDA值低于FIV-IL-6组、未感染组,SOD值较高(P<0.05),肝组织病变较轻；重组慢病毒对大鼠无明显毒副作用,大鼠肝脏组织中有目的基因Hyper-IL-6表达。
　　 结论：FIV-HIL-6成功转染大鼠肝脏组织,Hyper-IL-6对急性肝衰竭大鼠肝组织有明显的抗炎抗氧化作用,能有效改善大鼠肝功能及肝组织学状况,对急性肝衰竭大鼠具有保护治疗作用。