同源异型盒基因MSX1启动子甲基化其在乳腺癌中抑癌功能的研究

摘要

目的：表观遗传学调控和遗传学调控机制共同参与肿瘤的发生发展。其中抑癌基因启动子甲基化导致的基因沉默从而失去原有的抑癌功能在多种肿瘤发病中扮演非常重要的角色。本文探讨同源异型盒基因MSX1在乳腺癌中表达水平及其表观遗传学调控机制，了解该基因作为一个全新的候选抑癌基因在乳腺癌发病中的作用。
　　方法：首先运用半定量PCR(RT-PCR)检测MSX1在22种人类正常成熟组织及9株乳腺癌细胞中mRNA的表达水平；然后用甲基化特异性PCR(MSP)探索其启动子甲基化状态；再用DNA甲基转移酶抑制剂5'-aza-2'-deoxycytidine和组蛋白去乙酰化酶抑制剂 Trichostatin A(TSA)联合处理，使细胞去甲基化后再用RT-PCR和MSP分别检测MSX1的表达及甲基化水平变化情况；最后将MSX1表达质粒导入其表达缺失的乳腺癌MB468细胞中，用克隆形成实验观察MSX1对乳腺癌细胞生长的影响。
　　结果：1.RT-PCR显示MSX1在22种人类正常成熟组织中均有正常水平表达，但在67％(6/9)的乳腺癌细胞中完全沉默；2.MSP检测到其中78％(7/9)的乳腺癌细胞启动子发生高甲基化，但在正常乳腺组织标本中未发生甲基化；3.去甲基化药物处理后，MSX1表达水平恢复或增强，甲基化水平降低，非甲基化水平增高；4.外源性表达MSX1明显抑制MB468细胞克隆形成，表明MSX1有明显抑制乳腺癌细胞生长的作用(抑制率51.4％，p<0.01)。
　　结论：MSX1基因的表达降低或沉默在乳腺癌的发生发展中起重要作用，其主要机制是MSX1基因启动子频繁甲基化导致其抑癌功能失活，从而使乳腺癌细胞生长失控，参与乳腺癌的发病。MSX1对乳腺癌细胞生长有抑制作用。MSX1可能作为乳腺癌诊断的新的肿瘤标志物和治疗靶点。