牙本质基质蛋白-1在骨性Ⅱ、Ⅲ类错(牙合)畸形中的表达

摘要

下颌骨发育异常在正畸治疗过程中较为常见，其中下颌骨过度发育导致的Ⅲ类错牙合畸形及下颌骨发育不足导致的Ⅱ类错牙合畸形，对患者的颜面协调、咀嚼功能、颞下颌关节及心理有严重影响。下颌骨发育异常其过程较复杂，遗传占主要地位[1－2]。Dmp-1基因敲除鼠模型[3]，其下颌骨和髁状突软骨出现骨化不全、体积减小，推测Dmp-1可能是下颌骨形成必不可少的基因。
　　牙本质基质蛋白1(Dentin matrix protein1，Dmp-1)是富含丝氨酸的磷酸化细胞外基质蛋白，属于SIBLINGs家族成员[4]。Dmp-1在骨和软骨组织中的表达较高[5]，研究推测Dmp-1可能在下颌骨及髁状突软骨发育中有重要调控作用[6]。但在下颌骨发育异常导致的骨性Ⅱ、Ⅲ类错牙合畸形人群中Dmp-1的表达情况尚未见报道。探讨Dmp-1在下颌骨中的表达情况，有助于诊断和治疗下颌骨发育异常导致的错牙合畸形。
　　目的：
　　研究Dmp-1在骨性Ⅱ、Ⅲ类错牙合畸形患者血液中的表达情况，探讨Dmp-1的表达与下颌骨生长的关系。为下颌骨发育异常导致的骨性错牙合畸形提供诊断依据。
　　方法：
　　(1)实验选取骨性Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类错牙合各36例，其中Ⅰ类为对照组，Ⅱ、Ⅲ类为实验组。按改良颈椎分析法骨龄分期分为生长发育高峰期(CVS3期)实验组和对照组、生长高峰后期(CVS4)实验组和对照组，共计6组。采取各组新鲜血液样本。
　　(2)采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法，检测各组(ABC、A’B’C’)血液中Dmp-1mRNA的表达量。
　　(3)采用蛋白质印迹(Western-blot)法，检测各组(ABC、A’B’C’)血清中Drop-1蛋白的表达情况。
　　结果：
　　(1)RT-PCR检测结果显示：
　　生长发育高峰期(CVS3)，A(骨性Ⅰ类错牙合)组中Drop-1mRNA的表达量是：5.5931±1.2761μg/μl，B(骨性Ⅱ类错牙合)组中Dmp-1mRNA的表达量是3.5735±2.2683μg/μl，C(骨性Ⅲ类错牙合)组中Dmp-1mRNA的表达量是10.4310±1.0447μg/μl，骨性Ⅲ类与骨性Ⅰ类比较，两组有显著性意义(P<0.05)。骨性Ⅱ类与骨性Ⅰ类比较，无统计学意义意义(P>0.05)。
　　生长发育高峰后期(CVS4)，RT-PCR检测结果显示，A’(骨性Ⅰ类错牙合)组中Drop-1mRNA的表达量是：7.0763±1.7315μg/μl，B’(骨性Ⅱ类错牙合)组中Dmp-1mRNA的表达量是4.3206±1.8630μg/μl，C’(骨性Ⅲ类错牙合)中Dmp-1mRNA的表达量是11.9214±2.1761μg/μl，骨性Ⅲ类与骨性Ⅰ类比较，有显著性意义(P<0.05)。骨性Ⅱ类与骨性Ⅰ类比较，无统计学意义(P>0.05)。
　　(2)WB检测结果显示：
　　生长发育高峰期(CVS3)，Dmp-1蛋白在骨性Ⅰ类错牙合组(A)中的相对表达量是15.4064±2.9312μg/μl，在骨性Ⅱ类错牙合畸形组(B)中的相对表达量为12.5718±3.5302μg/μl，在骨性Ⅲ类错牙合畸形组(C)中的相对表达量是24.2109±4.4261μg/μl。统计学分析表明：骨性Ⅲ类与骨性Ⅰ类组Drop-1蛋白表达量比较具有统计学差异(P<0.05)，骨性Ⅱ类与骨性Ⅰ类组Drop-1蛋白表达量比较无统计学差异(P>0.05)。
　　生长发育高峰后期(CVS4)，Drop-1蛋白在骨性Ⅰ类错牙合畸形组(A')中的相对表达量是27.1705±2.7813μg/μl，在骨性Ⅱ类错牙合畸形组(B’)中的相对表达量为21.3025±2.0710μg/μl，在骨性Ⅲ类错牙合畸形组(C’)中的相对表达量是37.0534±3.7611μg/μl。统计学分析表明：骨性Ⅲ类与骨性Ⅰ类组Drop-1蛋白表达量比较，有统计学意义(P<0.05)，骨性Ⅱ类与骨性Ⅰ类组Drop-1蛋白表达量比较，无统计学意义(P>0.05)。
　　(3)Western-blot检测结果：各实验组均和Drop-1抗体产生免疫反应在PVDF膜上呈现条带，但Dmp-1在各组中表达的信号强弱不同。
　　结论：
　　(1)在发育高峰期(CVS3)和发育高峰后期(CVS4)，骨性Ⅲ类组中Drop-1的表达量均高于骨性Ⅰ类组，提示Dmp-1可能对人下颌骨的生长具有促进作用。
　　(2)在发育高峰期(CVS3)和发育高峰后期(CVS4)，骨性Ⅱ类组与骨性Ⅰ类组中Dmp-1的表达量均无明显差异，提示Dmp-1表达量的高低对骨性Ⅱ类组下颌骨发育影响不大，推测下颌发育不足可能有其他因子起主导作用。