姜黄素衍生物对四氯化碳诱导肝纤维化的治疗作用

摘要

目的：探讨姜黄素衍生物(Curc-OEG)对四氯化碳诱导肝纤维化的治疗效果。
　　方法：(1)大鼠肝纤维化模型建立：健康雄性SD大鼠85只，按完全随机分组原则进行分组，除正常组(A组)10只，其余各组15只，分别为模型组(B组)、低剂量治疗组(C组)、中剂量治疗组(D组)、高剂量治疗组(E组)、秋水仙碱组(F组)。各组分别给予普通饲料和自来水，除A组外，B、C、D、E、F组给予四肢内侧皮下注射四氯化碳(CCl4)与橄榄油的混合液(CCl4：橄榄油=2:3)，首次剂量为5mL/kg，以后为2mL/kg，2次/周，一共10周。
　　(2)检测姜黄素衍生物对四氯化碳诱导肝纤维化的治疗作用及其机制：造模第5周起，B组每天给予生理盐水尾静脉注射，C、D、E组分别给予25、50、100 mg.kg-1·d-1的姜黄素衍生物尾静脉注射，F组给予0.1 mg·kg·d-1秋水仙碱灌胃治疗。治疗过程中继续造模以及普通饲料喂养，每次造模前每只大鼠称量体重，以调整CCl4及Curc-OEG用药剂量。10周后将所有大鼠处死，心脏采血，测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)，取肝组织测羟脯氨酸(Hyp)含量。肝组织行HE和天狼星红染色，观察肝组织病理学变化以及纤维化程度，并采用Ishak评分系统对组织进行分期。RT-PCR法检测肝组织TIMP-1、MMP-13的mRNA含量的转录情况。Western bolt法检测CollagenⅠ蛋白的表达情况。
　　结果：10周后，与模型组比较，低、中、高剂量组及秋水仙碱组ALT、AST含量明显降低，但是与正常组比较，除高剂量组与正常组差异没有统计学意义，其余各组均有显著的升高(差异具有统计学意义)。另外根据检测肝组织Hyp含量结果相比较，与正常组比较，各组Hyp含量明显增高(差异具有统计学意义)；与模型组比较，低剂量组Hyp含量没有显著性差异，中、高剂量组以及秋水仙碱组Hyp明显降低(差异具有统计学意义)；与低剂量组比较，秋水仙碱组Hyp没有显著性差异；中、高剂量组Hyp含量明显低于低剂量组和秋水仙碱组，并且高剂量组明显低于中剂量组，差异均具有统计学意义。HE及天狼星红染色可观察到正常肝组织结构清晰，未见炎性细胞及胶原纤维增生，而模型组肝组织结构紊乱，在汇管区及中央静脉区域有粗细不一的纤维增生，甚至有的已经包绕整个肝小叶而形成纤维结节，而经过不同剂量的姜黄素衍生物治疗后的肝组织可见不同程度的纤维增生，但是可以发现随着治疗浓度的增高，肝纤维化程度明显减轻。
　　RT-PCR结果提示，除了低剂量组的MMP-13mRNA转录水平与模型组没有显著差异外，中、高剂量组与秋水仙碱组均有所上调(差异具有统计学意义)；并且可以观察到除秋水仙碱组和低剂量组差异没有统计学意义，而中、高剂量组明显高于低剂量组及秋水仙碱组，并且高剂量组明显高于低剂量组(差异均具有统计学意义)。而TIMP-1mRNA转录水平与MMP-13mRNA在各组间的表达刚好相反，与模型组比较，低剂量组转录水平没有显著性差异，但中、高剂量组及秋水仙碱组转录水平明显下调(差异具有统计学意义)；与低剂量组比较，秋水仙碱组下调没有显著差异；中、高剂量组下调较低剂量组和秋水仙碱组更明显(差异具有统计学意义)，且高剂量组下调比中剂量组下调更明显(差异具有统计学意义)。Western blot结果显示模型组CollagenⅠ蛋白表达及mRNA表达明显高于正常组(差异具有统计学意义)，经低剂量姜黄素衍生物治疗后，CollagenⅠ蛋白表达较模型组没有明显差异，而中、高剂量组和秋水仙碱组表达均有下调(差异具有统计学意义)；但秋水仙碱组下调与低剂量组没有明显差异，而中、高剂量组下调较秋水仙碱组和低剂量组更明显(差异具有统计学意义)，且高剂量组下调较中剂量组更明显(差异具有统计学意义)。
　　结论：Curc-OEG能明显减轻CCl4诱导的大鼠肝纤维化。