基于Au-MoO3/CS纳米复合膜修饰的HCV NS5A电化学免疫传感器的研究

摘要

目的：
　　HCV的感染人群广，区域大，发病后不能引起人们的足够重视而容易导致长期的肝疾病的趋势，但是HCV感染的早发现早隔离早治疗对于疾病蔓延趋势的遏制和病情的控制至关重要。HCV非结构5A蛋白监测在丙型肝炎病毒感染的诊断、病情发展以及预后判断有很重要的作用。电化学免疫传感器由于其具有价格低廉、操作简单、耗时短、灵敏度高、检测线低、易于商品化和集成化非常合适作为大量标本的筛查。本研究的目的在于，利用纳米材料的优良性能，制备电化学免疫传感器用于HCV NS5A蛋白的高灵敏而准确检测。
　　方法：
　　1.制备Au/MoO3-壳聚糖(CS)复合纳米材料。将MoO3纳米粒子超声分散于CS溶液制得混合溶液，加入HAuCl4溶液，HAuCl4在CS的还原作用下原位合成AuNPs在MoO3纳米粒子表面上得到Au-MoO3/CS复合纳米材料。用SEM对制备好的纳米复合材料进行表征。将此纳米复合材料修饰滴涂于GCE表面后，利用金巯基的结合，把单克隆抗体(MAb)修饰在纳米复合材料上。
　　2.在柠檬酸三钠的还原作用下，将HAuCl4还原生成的AuNPs生长于介孔硅MCM-41的表面，将多克隆抗体(PAb)和HRP依靠金-巯键的结合作用修饰于介孔硅的表面，利用夹心法对HCV NS5A蛋白进行检测。对于传感器修饰过程和电化学性能用CV和EIS进行表征，并对此免疫传感器的性能进行了考察。
　　结果：
　　制备的纳米复合材料中，AuNPs生长在MoO3纳米颗粒的表面，MoO3纳米颗粒均匀分散于CS溶液中。所制得的纳米复合材料具有良好的导电性、成膜性和生物相容性，用此膜作为MAb/Ag/PAb的固定基质所制得的电化学免疫传感器，对HCV NS5A蛋白显示了良好的检测效果，线性范围为1 ng·mL-1到50μg·mL-1，除此之外，此生物传感器还具有良好的重复性和稳定性，重复性能优异，RSD为4.5％。
　　结论：
　　所制成的HCV NS5A免疫传感器具有良好的稳定性，特异性，选择性和低的检测限等优异性能，并能够应用到临床的实际应用中。

目录

声明

符号说明

摘要

前言

1 实验部分

1．1 材料与仪器

1．2 制备Au-MoO3／CS纳米复合膜

1．3 电极修饰

1．4 准备HRP标记的多克隆抗体

1．5 检测过程

2 结果与分析

2．1 纳米复合材料的表征

2．2 不同修饰电极的电化学表征

2．3 实验参数的优化

2．4 检测HCV NS5A的标准曲线测量

2．5 生物传感器的选择性、重复性和稳定性

2．6 实际样品的检测

结论

参考文献

文献综述 电化学免疫传感器实验方法的综述

致谢

硕士期间主研课题和发表的论文