HBV通过激活转录因子AP-2α调节Raf1启动子活性

摘要

目的：
　　研究HBV增强Raf1表达的分子机制。
　　方法：
　　1.构建Raf1启动子荧光素酶报告质粒和5'缺失的Raf1启动子荧光素酶报告质粒，分别转染入HepG2细胞，用双荧光素酶报告分析系统检测Raf1启动子活性，以确定Raf1启动子主要作用区域。
　　2.将构建的5'缺失的Raf1启动子荧光素酶报告质粒分别与HBx表达质粒pCMV-sport6-HBx或对照质粒pCMV-sport6共转染入HepG2细胞，研究HBx与Raf1启动子主要作用区域的关系，再用RNA干扰的方法抑制HepG2.2.15细胞中HBx，对结果进行进一步验证。
　　3.在HepG2.2.15细胞中，AP-2α表达质粒与5'缺失的Raf1启动子荧光素酶报告质粒共转染，AP-2α干扰质粒与5'缺失的Raf1启动子荧光素酶报告质粒共转染，分别验证AP-2α对Raf1启动子活性的影响。
　　4.用RT-PCR，Real-Time PCR和Western Blot的方法验证在HepG2细胞和HepG2.2.15细胞中AP-2α的表达差异。
　　结果：
　　1.荧光素酶活性分析结果显示-209～-133bp是Raf1启动子上的主要作用区域。
　　2.-209～-133bp区域是HBx增强Raf1启动子活性过程中主要作用区域。
　　3.转录因子AP-2α可以增强Raf1启动子活性，在HepG2.2.15细胞抑制转录因子AP-2α后，Raf1启动子活性明显下降。
　　4.RT-PCR，Real-Time PCR和Western Blot结果显示在mRNA和蛋白水平上，HepG2.2.15细胞中的AP-2α表达量明显高于HepG2细胞。
　　结论:
　　HBV增强Raf1启动子活性作用可能是通过促进AP-2α表达量来完成的，这一发现为研究HBV相关的HCC的发生发展提供了一种新的的分子机制。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

第一部分 Raf1启动子活性主要作用区域的确定

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

第二部分 HBx与Raf1启动子主要活性区域间关系

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

第三部分 转录因子AP-2α增强Raf1启动子活性

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

第四部分 HBV与转录因子AP-2α的关系

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

全文总结

参考文献

文献综述 人类肝细胞癌的形成

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文