停止高糖,转录共激活子p300持续活化及机制

摘要

目的:以人系膜细胞(HMCs)作为体外模拟代谢记忆的研究对象，观察转录共激活子p300及组蛋白乙酰化H3(Ac-H3)、Ac-H4蛋白表达规律，并探讨p300在其中的潜在汇集点作用。
　　 方法:将培养的HMCs按以下分组处理:①高糖诱导代谢记忆模型，分为正糖组（NG，5.5mmol/L D-葡萄糖×2d）、渗透压组(LG，NG+19.5mmol/L L-葡萄糖×2d)、高糖组(HG，25mmol/L D-葡萄糖×2d)、记忆组(M1、M2、M3组，25mmol/L D-葡萄糖×2d+5.5mmol/L D-葡萄糖×3、6、9d)、持续正糖组（NC，5.5mmol/L D-葡萄糖×9d）;②采用H2O2模拟氧化应激记忆模型，分为正糖组(NG，5.5mmol/L D-葡萄糖×30min);正糖+H2O2组(H2O2，5.5mmol/L D-葡萄糖+100μmol/LH2O2×30min); H2O2记忆组(H2O2-M，5.5mmol/L D-葡萄糖+100μmol/LH2O2×30min+5.5mmol/L D-葡萄糖×3d);正糖对照组（NG3，5.5mmol/LD-葡萄糖×3d）。③蛋白激酶C(PKC)β2激活记忆模型，分为正糖组（NG，5.5mmol/L D-葡萄糖×2d）;高糖组(HG，25mmol/L D-葡萄糖×2d);记忆组（M，25mmol/L D-葡萄糖×2d+5.5mmol/L D-葡萄糖×3d）;空载体记忆组（HN，25mmol/L D-葡萄糖+Ad5-null×2d+5.5mmol/L D-葡萄糖×3d）;PKCβ2激活记忆组（PO，25mmol/L D-葡萄糖+Ad5-PKCβ2×2d+5.5mmol/L D-葡萄糖×3d）;PKCβ2抑制剂记忆组(PI，25mmol/L D-葡萄糖×2d+10μmol/L CGP53353+5.5mmol/L D-葡萄糖×3d)。④糖化终产物记忆模型，分为正糖组(NG，5.5mmol/L D-葡萄糖×2d);正糖+AGEs组(AGEs，5.5mmol/L D-葡萄糖+250μg/ml AGEs×2d);AGEs记忆组(AGEs-M，5.5mmol/L D-葡萄糖+250μg/mlAGEs×2d+5.5mmol/L D-葡萄糖×3d); BSA组（NG+BSA，给予同浓度BSA对照）。二氢二氯荧光素(DCFDA)及酶标仪检测细胞内活性氧(ROS)的表达。Western blotting检测各组细胞p300、Ac-H3和Ac-H4及PKCβ2蛋白表达水平。
　　 结果:①HG组p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表达增加，分别较NG组增加了1.15倍、0.93倍和0.87倍(P＜0.05)，同时伴有PKCβ2蛋白及胞内ROS水平上调;M1、M2、M3组p300、Ac-H3、Ac-H4、PKCβ2蛋白水平及ROS表达水平较NG组仍显著为高，即使M3组亦较NG组分别增加75％、49％、47％、98％和48％(P＜0.05)。②H2O2组p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表达均升高，较对照组分别升高了1.03倍、0.85倍和0.79倍(P＜0.05)，而H2O2-M组各蛋白表达较对照组差异无统计学意义。③与M组比较，PO组p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表达进一步上调，分别为M组的1.25倍、1.06倍和1.10倍(P＜0.05)，选择性PKCβ2抑制剂CGP53353可以显著降低上述蛋白表达。④AGEs组p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表达上调，较对照组分别升高了1.73倍、1.08倍和1.05倍(P＜0.05)，AGE-M组各蛋白较对照组分别增加了1.47倍、0.95倍和1.03倍(P＜0.05)。
　　 结论:HMCs存在转录共激活子p300及表观修饰持续活化的记忆效应，p300可能系高糖致生化代谢及表观遗传记忆刺激的汇聚点。

目录

声明

符号说明

摘要

前言

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

1．3 统计学处理

2 结果

2．1 高糖记忆对HMCs p300、Ac-H3、Ac-H4和PKc β2蛋白水平表达的影响

2．2 高糖记忆对HMCs表达ROS水平的影响

2．3 H2O2诱导氧化应激记忆模型下HMCs p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表达

2．4 蛋白激酶Cβ2激活记忆模型下HMCs p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表达

2．5 AGEs诱导糖化终产物记忆模型下HMCs p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表达

3 讨论

全文总结

参考文献

文献综述 转录共激活子P300与糖尿病肾病

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文