低强度聚集超声联合载阿霉素微泡-微球复合体靶向治疗兔VX2肝癌的实验研究

摘要

本研究分为三部分：
　　第一部分、载阿霉素微泡-微球复合体的制备及性能检测
　　目的：制备一种载阿霉素微泡-微球复合体(ADM-NMCs)并测定其一般特性。
　　方法：采用双乳化法制备载阿霉素PLGA纳米微球(ADM-NPs)，并观察其形态，检测其粒径分布范围，电位，包封率和载药量等性质;采用机械振荡法制备带氨基的脂质微泡造影剂（NH2-MB），并对其进行形态，粒径，电位等性质检测;然后将ADM-NPs末端的羧基用活化剂EDC/NHS活化后，与NH2-MB末端的氨基反应后共价连接到脂质微泡的表面，制备成ADM-NPs-MB Complexes(ADM-NMCs)，对其进行粒径分布及每个微泡的平均载药量等性质检测并对其进行了体外释药实验观察。
　　结果：ADM-NPs粒径分布均匀，平均粒径为249.8nm，包封率为86.1％，载药量为7.8％，Ztea电位为-0.82 mv; NH2-MB平均粒径为1032 nm，Ztea电位为0.7 mv; ADM-NMCs的平均粒径为1721 nm，每个微泡平均载阿霉素量为0.28 ng，低强度超声辐照后释放的药物量明显高于未辐照组。
　　结论：本实验成功制备了载阿霉素微泡-微球复合体，粒径分布均匀，载药量较高，低强度聚焦超声辐照后可明显增强药物释放率，提示载阿霉素微泡-微球复合体可在实时超声监控下爆破体内定位释放药物，实现对肿瘤的区域的靶向治疗。
　　第二部分、低强度聚焦超声靶向破坏微泡的实验研究
　　目的：探讨低强度聚焦超声体外局部靶向爆破脂质微泡的能力;探讨低强度聚焦超声体内定位靶向爆破载阿霉素微泡-微球复合体并更精确地定位释放药物的能力。
　　方法：采用机械振荡法制备普通脂质微泡，将脂质微泡稀释后放入自制的乳胶水囊中，分别用同等强度的普通诊断超声和低强度聚焦超声辐照10s后，采用二维超声显影模式观察普通诊断超声和低强度聚焦超声靶向破坏微泡的范围;选取20只健康新西兰大白兔，将新型载阿霉素微泡经兔耳缘静脉注射后，在二维超声监控下，用低强度聚焦超声辐照肝脏60s，辐照结束后，处死兔子，取出肝脏组织，分别分离距焦域不同位置处的四块肝脏组织块，用反相高效液相色谱法测定不同距离处肝脏组织所含阿霉素的量。
　　结果：普通脂质微泡在超声辐照前的声像图呈均匀的高回声，用普通诊断超声辐照后，声场内的大部分微泡被爆破呈不均匀的低回声，而低强度聚焦超声辐照后在沿超声辐照方向的微泡爆破范围呈梭形的低回声区，在与低强度聚焦超声声束垂直方向的微泡爆破范围呈圆形的低回声区，且圆形低回声区的范围随着低强度聚焦超声的声强的增大而增大。低强度聚焦超声辐照载阿霉素微泡-微球复合体后，处于辐照中心区域的肝脏组织中阿霉素含量最高，距离辐照中心区域越远，肝脏组织的阿霉素含量越低。
　　结论：与普通诊断超声相比，低强度聚焦超声具有精确靶向爆破微泡且定位释放药物的能力，因而低强度聚焦超声可更精确地进行体内载药微泡定位爆破释放药物进行肿瘤靶向药物治疗。
　　第三部分、载阿霉素微泡-微球复合体体内外显影观察及其联合低强度聚焦超声对兔VX2肝癌的作用研究
　　目的：探讨载阿霉素微泡-微球复合体造影剂对兔肝癌的超声造影效果;探讨低强度聚焦超声靶向爆破载阿霉素微泡-微球复合体定位释放药物对兔肝癌的治疗效果。
　　方法：新西兰大白兔64只，采取瘤块种植法于肝左叶植入VX2肿瘤组织块，建立VX2肝癌模型。建模14天后，选取10只荷瘤兔，随机分为两组，分别为普通脂质微泡组（经耳缘静脉注射普通脂质微泡）和载阿霉素微泡-微球复合体组（经耳缘静脉注射载阿霉素微泡-微球复合体），进行超声造影，并采用DFY-Ⅱ型图像分析软件评价超声造影效果;建模14天后，取54只荷瘤兔，随机分为6组，分别为空白对照组（经耳缘静脉注射生理盐水），低强度聚焦超声联合载阿霉素纳米微球组（经耳缘静脉注射载阿霉素纳米微球，并用低强度聚焦超声辐照），低强度聚焦超声联合脂质微泡组（经耳缘静脉注射脂质微泡，并用低强度聚焦超声辐照），低强度聚焦超声联合脂质微泡和载阿霉素纳米微球混合组（经耳缘静脉注射脂质微泡和载阿霉素纳米微球，并用低强度聚焦超声辐照），普通诊断超声联合载阿霉素微泡-微球复合体组（经耳缘静脉注射载阿霉素微泡-微球复合体，并用普通诊断超声辐照），低强度聚焦超声联合载阿霉素微泡-微球复合体组（经耳缘静脉注射载阿霉素微泡-微球复合体，并用低强度聚焦超声辐照），治疗前后用诊断超声观察肿瘤生长情况，并测量其最长径和最短径，计算各组肿瘤抑瘤率，采用免疫组化法检测肿瘤组织PCNA表达情况;TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况，记录各组兔子中位生存期，比较各组存活情况。
　　结果：在超声造影模式下，普通脂质微泡和载阿霉素微泡-微球复合体经静脉注射后，肝癌区域均可见回声增强，且二者的达峰时间，峰值和体内清除时间均相似。免疫组化结果显示，低强度聚焦超声联合载阿霉素微泡-微球复合体组的肿瘤抑瘤率显著高于其它各组，肿瘤增殖明显受到抑制，增殖指数显著低于其它各组（P＜0.05），细胞凋亡指数显著高于其它各组（P＜0.05），动物存活时间显著长于其它各组。
　　结论：载阿霉素微泡-微球复合体具有显著的造影效果，可在二维超声的监控下靶向爆破定位释放药物。低强度聚焦超声联合载阿霉素微泡-微球复合体能显著抑制VX2肝癌的增殖，促进VX2肝癌细胞凋亡，对VX2肝癌具有显著的抑瘤效果，有望为临床肿瘤治疗提供一种安全无创的治疗方式。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

参考文献

第一部分 载阿霉素微泡-微球复合体的制备及性能检测

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

第二部分 低强度聚焦超声靶向破坏微泡的实验研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

第三部分 载阿霉素微泡-微球复合体体内外显影观察及其联合低强度聚焦超声对兔VX2肝癌的作用研究

第一节 载阿霉素微泡-微球复合体体内外增强超声显像的实验研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

第二节 低强度聚焦超声联合载阿霉素微泡-微球复合体靶向治疗VX2肝癌的实验研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

全文总结

附图

文献综述 超声微泡造影剂与肝癌靶向药物治疗

致谢

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