外源性神经营养素-3(NT-3)通过MAPK信号通路促进神经元细胞增殖的机制研究

摘要

第一部分 NT-3促进人神经元细胞生长的最佳作用时间与浓度
　　目的：选择NT-3促进人神经元细胞生长的最佳作用时间与浓度。
　　方法：用MTT法检测了10,20,40和80nM的 NT-3作用于人神经元细胞后于第2，4，6和8天计算生长率。
　　结果：神经细胞在第四天的生长情况显著高于其它组（P<0.05）,而在第四天的20nM的 NT-3作用细胞后的生长率显著高于其它三个浓度（P<0.05）。
　　结论：第四天的20nM浓度的 NT-3作用下的人神经元细胞生长率显著高，促进增殖效果最好。
　　第二部分外源性NT-3通过ERK信号通路促进神经元细胞增殖
　　目的：通过上实验得到的NT-3对人神经元细胞作用的最佳的浓度和时间来进一步作用于该细胞，研究其对神经元细胞促生长作用具体通过MAPK信号通路中的哪个途径实现的。
　　方法：20nM的NT-3作用于人神经元细胞并于0,2,4,8和12h收集细胞，用Western blot实验分别检测了MAPK通路的关键蛋白ERK1/2,JNK,P38及磷酸化的ERK1/2,JNK,P38的表达情况。然后用RNA干扰的方法将此关键蛋白沉默，用20nM的NT-3作用于人神经元细胞并于第2，4，6和8天检测其生长率。
　　结果：磷酸化的ERK1/2的表达量在NT-3作用后随着作用时间的增加而增加（P<0.05），且在6小时达到最高而后保持不变（P<0.05）。然后将ERK1/2干扰，在干扰组中，ERK1/2的下游蛋白p-p90rsk的表达很少且不随时间的变化而变化，当ERK被干扰后，细胞的生长情况没有受到影响。
　　结论：NT-3是通过ERK通路对人神经元细胞的生长增殖发挥作用的。
　　第三部分外源性NT-3与其受体结合后通过ERK通路促进神经元细胞增殖
　　目的：探讨外源性NT-3通过与其受体结合后通过ERK通路促进神经元细胞增殖
　　方法：通过RNA干扰的方法将NT-3的受体TrkC沉默，用MTT法检测了10,20,40和80nM的 NT-3作用于人神经元细胞后于第2，4，6和8天计算生长率，用Western blot实验分别检测了MAPK通路的关键蛋白ERK1/2,JNK,P38及磷酸化的ERK1/2,JNK,P38的表达情况。
　　结果：TrkC干扰后，细胞在这八天的生长中无显著变化（P>0.05）,而这四个浓度的 NT-3作用下的神经细胞的生长率也无显著变化（P>0.05）。磷酸化的JNK和P38在NT-3作用后0,2,4,8和12h无显著变化。而磷酸化的ERK1/2的表达量在NT-3作用后也无显著变化(P>0.05）。
　　结论：外源性NT-3通过与其受体结合后通过ERK通路促进神经元细胞增殖。

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前言

第一部分 NT-3 促进人神经元细胞生长的最佳作用时间与浓度

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第二部分 外源性NT-3通过ERK信号通路促进神经元细胞增殖

1 材料

2 方法

3结果

4 讨论

第三部分 外源性NT-3与其受体结合后通过ERK通路促进神经元细胞增殖

1 材料

2方法

3结果

4讨论

结论

参考文献

文献综述: 嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展

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