热休克蛋白70在气道黏液高分泌中的作用

摘要

目的：观察香烟提取物（Cigarette smoke extract，CSE）诱导气道黏液高分泌中热休克蛋白70（Heat shock protein70，HSP70）及AP-1（Activator protein-1，AP-1）的变化及关系，探讨热休克蛋白70在气道黏液高分泌中的作用及机制。
　　方法：用8％香烟提取物处理人气道 A549细胞株（Human airway cells, A549）后，分别给予HSP70抗体阻断剂、c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）特异性抑制剂SP600125进行干预。实验共分4组：空白对照组（无血清、双抗培养液进行培养）、CSE刺激组（加入8%CSE培养24 h）、HSP70抗体组（HSP70单抗预处理30 min，再给予8%CSE继续培养24 h）、SP600125组（加入JNK特异性抑制剂SP60012530μmol/L预处理30 min，再给予8%CSE继续培养24 h）。酶联免疫吸附（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法检测各组中MUC5AC在蛋白水平的相对表达量，逆转录-PCR（Reverse transcription-PCR，RT-PCR）检测MUC5AC mRNA的相对表达量，Western印迹法检测 HSP70水平，Western印迹法检测 JNK及 AP-1（主要为c-Jun）磷酸化水平。
　　结果：CSE刺激组细胞MUC5AC mRNA、MUC5AC蛋白、p-JNK、c-Jun、p-c-Jun相对表达量（0.64±0.11、0.52±0.07、0.73±0.06、0.67±0.10、0.67±0.09）均显著高于空白对照组（0.28±0.06、0.26±0.10、0.30±0.05、0.30±0.08、0.36±0.08）、HSP70抗体组（0.29±0.09、0.30±0.12、0.34±0.06、0.47±0.19、0.39±0.13）和SP600125组（0.31±0.14、0.38±0.06、0.39±0.04、0.44±0.12、0.48±0.11）， HSP70（0.75±0.09）也显著高于空白对照组（0.29±0.03）、HSP70抗体组（0.40±0.11）（均P<0.05）。
　　结论：CSE可以诱导气道上皮细胞中 HSP70及 AP-1的升高，同时HSP70可能通过JNK/AP-1信号通路上调气道A549细胞中MUC5AC的表达。

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英文摘要

前言

1. 材料与方法

1.1 实验细胞

1.2 主要试剂

1.3 主要仪器和设备

1.4 CSE制备

1.5 A549细胞复苏培养、分组及模型建立

1.6 提取保存各组细胞培养24h后的蛋白

1.7 ELISA法检测MUC5AC含量

1.8逆转录PCR检测MUC5AC mRNA的表达

1.9 Western印迹法检测细胞HSP70，p-JNK，AP-1蛋白含量

2.0 统计学处理

2. 结果

2.1 MUC5AC

2.2 MUC5AC mRNA

2.3 Western印迹法检测

3. 讨论

全文总结

参考文献

文献综述: 热休克蛋白70与AP-1在气道黏液高分泌的研究进展

致谢

研究生期间发表的论文