博尔纳病病毒感染对新生大鼠海马中神经系统相关MicroRNAs的影响

摘要

背景及目的：
　　博尔纳病病毒（Borna Disease Virus，BDV）是一种非分节段单股负链RNA病毒，具有高度嗜神经性,不仅可能使神经系统来源细胞株形成持续性的非细胞溶解性感染，而且可以使人类感染暴发流行脑炎，也很容易使动物的中枢神经系统尤其是边缘系统(如海马)受到感染，产生如焦虑、过度兴奋、攻击、异常游戏行为及认知缺陷等类似于人类精神分裂症、孤独症等情感障碍疾病的宿主行为障碍。
　　微小RNA(MicroRNAs, miRNAs)是一类新发现的非编码小RNA分子，它们能够通过与靶基因mRNA上的特定序列结合抑制靶基因的翻译或剪切，进而参与到各种生物学过程,包括发育、细胞分化、肿瘤生长等。许多miRNA与病毒复制、增殖以及细胞的应答等有关。
　　miRNA芯片技术通过对miRNA表达谱进行高通量的全面分析，提供一系列数据信息，有助于从中提炼出新的假说，揭示疾病的分子机制。
　　研究 miRNA在宿主抗病毒感染过程中所起的作用，可能会为miRNA与病毒感染的研究提供新的途径。本课题旨在研究 BDV病毒对新生SD大鼠海马中miRNA表达及生物学功能的影响。
　　方法：
　　1、选用出生后24 h内的新生SD大鼠，颅内接种病毒滴度为2×105 FFU/ml的BDV Hu-H1病毒液，构建神经发育障碍模型（BDV组或CON组），并用等量PBS液接种作为正常对照组（CON组）。
　　2、感染56 d后，分离出20只（10只/组）大鼠的海马。
　　3、8只（4只/组）海马用Trizol法提取出miRNA后，进行芯片检测和生物信息学分析，初步筛选出显著性异常表达的miRNA。
　　4、6只（3只/组）海马用Qiagen试剂盒提取出miRNA后，进行RT-qPCR检测，进一步验证初步筛选出的miRNA。
　　结果：
　　1、miRNA芯片检测初步筛选出9个显著性异常表达的miRNA。与CON组相比，BDV组7个miRNA(miR-145*, miR-146a*, miR-192*, miR-200b, miR-223*, miR-449a和miR-505)显著性上调，2个miRNA(miR-126和miR-374)显著性下调。
　　2、RT-qPCR进一步验证后，5个(miR-126, miR-200b, miR-374, miR-449a和 miR-505)显著性下调(P<0.05)，其余4个(miR-145*,miR-146a*, miR-192*, miR-223*)没有显著性变化。
　　结论：
　　1、本研究首次报道了BDV病毒对新生SD大鼠海马中miRNA表达及生物学功能的影响。
　　2、本研究推测出miR-126，miR-200b和miR-449a与新生SD大鼠BDV感染后神经系统发育、细胞分化、增殖和凋亡高度相关。

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英汉缩略语名词对照

中文摘要

英文摘要

前言

1 材料

1.1 实验动物与病毒接种

1.2 主要试剂和耗材

1.3 器械和仪器

2 方法

2.1 实验溶液配制

2.2 SD新生大鼠病毒接种

2.3 SD大鼠海马样品采集

2.4 RNA抽提

2.5 芯片用RNA质量检查

2.6 RT-PCR用RNA质量检查

2.7 芯片实验

3 结果

3.1 芯片结果

3.2 RT-qPCR结果

4 讨论

全文总结

参考文献

文献综述:MicroRNA在神经精神疾病中作用的研究进展

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文