耐药性癫痫中cGKⅡ的表达及作用机制研究

摘要

中枢神经系统的兴奋与抑制失衡是癫痫发生的重要因素。AMPA受体是谷氨酸受体中介导快速兴奋性突触传递最主要的受体，其亚基GluA1锚定到突触后膜可增强兴奋性突触传递而参与痫性发作，而cGKⅡ作为一种环磷酸鸟苷依赖性蛋白激酶，可调控 GluA1从胞浆到胞膜的转运，有可能参与了癫痫发作。为验证这种假说，我们从动物模型和癫痫患者、从行为学和细胞功能多个角度探索了其参与癫痫发生发展的可能性。结果发现 cGKⅡ在颞叶癫痫患者及点燃大鼠脑组织中均表达上调,而cGKI无明显改变。在体行为学研究表明，激活cGKⅡ可增加匹罗卡品诱发惊厥的严重程度，显著缩短发作潜伏期，而抑制cGKⅡ则具有相反的效应。通过对离体脑片的电生理学研究，发现激活cGKⅡ可降低4AP诱发痫样放电的阈值，而抑制cGKⅡ可减轻痫样放电的严重程度，支持我们的研究假设。为了解其参与惊厥发生的机制，我们利用膜片钳技术，进一步研究发现 cGKⅡ参与惊厥发生的机制主要是通过磷酸化GluA1的Ser845位点，从而改变GluA1在细胞膜上表达及功能,进而增强 AMPA受体介导的兴奋性突触传递而致兴奋与抑制失衡，改变神经网络兴奋性从而参与惊厥发作，研究结果提示抑制cGKⅡ有可能成为治疗癫痫的一个潜在靶点。

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前言

1材料与方法

1.1伦理学批准

1.2人脑标本的收集和临床特征

1.3匹罗卡品癫痫模型构建

1.4标本处理

1.5Western blot实验

1.6免疫荧光染色

1.7大鼠行为学干预实验

1.8电生理实验

1.9实验数据处理及分析

2结果

2.1 cGKII在颞叶癫痫患者和点燃动物模型脑组织中表达上调

2.2 cGKII在癫痫患者以及大鼠脑组织中主要表达于神经元突触后膜

2.3体内干预cGKII对匹罗卡品点燃鼠的痫性发作具有修饰作用

2.4体外干预cGKII可调节4AP诱导的癫痫样放电

2.5干预cGKII可改变兴奋性突触传递，而对抑制性突触传递无影响

2.6 cGKII可通过突触后机制影响AMPAR介导的突触传递

2.7 cGKII通过对钙通透性的AMPA受体的调控影响兴奋性突触传递

2.8 cGKII通过磷酸化GluA1 的Ser845(S845)位点使GluA1在细胞膜上表达增加，且不受PKA通路的影响

3讨论

全文总结

参考文献

附图

文献综述: cGKs及其在中枢神经系统中的研究与进展

致谢

攻读硕士学位期间已发表及待发表的文章