吴茱萸碱抑制人骨肉瘤细胞143B增殖与PI3K/Akt信号关系的研究

摘要

骨肉瘤是临床上最为常见的骨组织恶性肿瘤，多种抗肿瘤药物的联合应用治疗骨肉瘤已经被引入临床超过40年，但是，仍有超过80％的早期局限性骨肉瘤的患者会全身转移。因此，非常有必要寻求一种新型更加有效的方式来治疗骨肉瘤。
　　本实验小组通过结晶紫染色和定量分析、Western blot、PCR、Annexin V-EGFP染色以及流式细胞仪分析发现：EVO既能显著地抑制143B细胞的增殖，又能诱导143B细胞的凋亡，并且呈现出了浓度依赖性和时间依赖性；我们在裸鼠上建立了异位成瘤模型，从取出的大体标本看出，EVO实验组与对照组相比较，EVO能明显减小瘤块的体积与重量。H&E染色与免疫组织化学染色结果均显示，EVO能呈现浓度依赖性的提高骨肉瘤细胞的坏死率。
　　通过Western blot和PCR实验，我们证实了相对于对照组，EVO实验组能呈浓度依赖性的提高PTEN在143B细胞中的表达。结晶紫实验结果显示，外源性的PTEN能够增强EVO对于143B的增殖抑制作用，沉默PTEN能够逆转EVO对于143B的增殖抑制。此外，PTEN抑制剂（VO-Ohpic）同样能够逆转EVO对于143B的增殖抑制作用。结果提示，PTEN基因参与了EVO对于骨肉瘤的增殖抑制作用
　　本实验通过给予外源性的Ad-PTEN，siAd-PTEN以及Western blot蛋白功能鉴定，分析了PTEN在EVO对人骨肉瘤细胞143B的增殖抑制作用中与PI3K/Akt的相互关系。结果发现，EVO呈浓度依赖性抑制磷酸化Akt（p-Akt）的产生，而对于非磷酸化Akt并没有影响。外源性过表达PTEN同样能够使EVO抑制p-Akt的产生，沉默PTEN能够使EVO增加p-Akt的产生，但是二者对于非磷酸化Akt并没有显著影响。实验结果初步发现，EVO在143B细胞中对于PI3K/Akt信号转导的抑制与PTEN的上调有关。

目录

封面

目录

英汉缩略语名词对照

中文摘要

英文摘要

前言

1 材料和方法

1.1 主要材料、试剂与仪器

1.2 主要药物与试剂的配制

1.3 实验方法

2 结果

2.1 EVO对人骨肉瘤细胞143B骨肉瘤细胞增殖的影响

2.2 EVO能诱导人骨肉瘤细胞143B凋亡

2.3 EVO抑制了人骨肉瘤细胞143B异位接种后肿瘤的生长

2.4 EVO抑制了人骨肉瘤细胞143B的增殖与PTEN表达的上调有关

2.5 EVO对PI3K/Akt通路信号转导的抑制与PTEN的上调有关

3 讨论

全文总结

参考文献

附图

文献综述: PTEN在人类恶性肿瘤中作用的研究

致谢

在校期间发表论文