从内质网应激途径探讨益气除痰方对肺癌未折叠蛋白反应相关蛋白ATF6、XBP1、CNX的影响

摘要

背景：恶性肿瘤已成为威胁人类健康的常见疾病之一。根据世界卫生组织发布的报告，肺癌的发病及死亡是恶性肿瘤的第一位，且仍在不断上升，因此肺癌的防治成为全世界广泛关注的问题。目前针对肺癌的治疗方法主要包括手术、放疗、化疗、分子靶向治疗及生物治疗等，但存在副作用大，易耐药，疗效不理想等问题。中医药作为我国传统且独有的方法，在防治肺癌上有独特的效果。益气除痰方已经过前期研究及长期的临床实践证明，能有效地抑制肺癌细胞生长及抑制肺癌的复发转移。
　　目的：本研究通过应用益气除痰方( Yiqi Chutan formula，YQCTF)干预，以人类肺癌细胞A549为靶细胞，结合BALB/c裸小鼠实验，测量并计算肺癌A549裸鼠移植瘤体积、瘤重、抑瘤率，检测移植瘤激活转录因子6（activating transcription factor6，ATF6）、调控转录因子X盒结合蛋白1（X-box binding protein1，XBP1）、钙联蛋白（calnexin， CNX）的表达情况，从调控内质网应激途径的角度研究其抗癌的具体机制。
　　方法：在BALB/c裸鼠背侧皮下接种处于对数生长期的A549细胞悬液（1×107/mL），0.2mL/只。随机分为模型组（生理盐水0.2mL）、顺铂注射液组（0.002g·kg-1）、益气除痰方低剂量组（3.0 g·kg-1）、益气除痰方高剂量组（6.0 g·kg-1）、联合用药组（6.0 g·kg-1/0.002g·kg-1），每组8只。接种第8天，给予中药灌胃，每天1次，1次0.2mL，连用14天。第17天，顺铂注射液组及联合用药组给予顺铂注射液腹腔注射，每天1次，1次0.2mL，连用5天。在第22天，麻醉后处死裸鼠，称取瘤重，测量瘤体大小。采用免疫组织化学法、免疫印迹法（Western blot）及实时荧光定量多聚核苷酸链式反应（ quantitative real-time PCR， qRT-PCR）法检测各组移植瘤组织ATF6、XBP1及CNX的表达。
　　结果：与模型组比较，除益气除痰方低剂量组外，各组移植瘤体积、瘤重、ATF6、XBP1、CNX mRNA表达、蛋白表达及平均吸光度均明显降低（P＜0.01）。联合用药组瘤重及瘤体积低于顺铂注射液组（P＜0.05，P＜0.01）。联合用药组ATF6、XBP1及CNX的平均吸光度较顺铂注射液组降低（P＜0.05，P＜0.01）。联合用药组 ATF6、XBP1、CNX蛋白及mRNA的表达低于顺铂注射液组（P＜0.01）。
　　结论：益气除痰方能够抑制肺癌A549裸鼠移植瘤的生长，其机制与降低瘤体组织ATF6、CNX、XBP1蛋白及其mRNA的表达，减少肿瘤细胞发生未折叠蛋白反应有关。

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前言

第一部分 益气除痰方对肺癌A549裸鼠移植瘤生长的影响

1材料

2方法

3结果

4小结

第二部分 益气除痰方对肺癌A549裸鼠移植瘤ATF6、XBP1、CNX表达的影响

1材料

2方法

3 结果

4 小结

讨论

总结

创新及意义

参考文献

附图

文献综述: 中医药对肺癌化疗所致不良反应的影响

致谢

攻读硕士期间发表的论文