MiR-21协同BMP9对间充质干细胞成骨分化的作用及机制研究

摘要

目的：探讨miR-21与BMP9在成骨分化过程的表达关系，明确miR-21在BMP9诱导成骨分化中的表达情况；揭示miR-21与BMP9联合后的成骨效应，明确miR-21协同BMP9的成骨作用；明确miR-21在成骨分化过程中的靶基因，证明其与miR-21的直接靶向作用。
　　方法：首先用Ad-BMP9感染C2C12，MEFs,C3H10 T1/2细胞，采用Q-PCR方法在0，1，3，5，7，9天检测miR-21的表达情况。搜集健康人骨髓标本，分离培养骨髓间充质干细胞(HMSC)，分别在2,3,4代检测miR-21的内源性表达。观察miR-21在HMSC分化过程中的表达情况。首先通过检测早期成骨指标碱性磷酸酶染色的变化以及茜素红 S检测晚期成骨指标钙盐沉积来验证miR-21在BMP9诱导成骨分化中的作用。随后，通过 Western Blot方法来检测 miR-21，antimiR-21对BMP9/Smad经典信号通路下游信号分子 p-Smad1/5/8,Runx2表达的影响。运用生物信息学分析，搜寻miR-21在BMP9诱导成骨分化中的潜在靶基因，过表达miR-21后检测Smad7的基因和蛋白水平表达情况。采用双荧光素酶报告实验，验证miR-21与Smad7的直接靶向作用。
　　结果：在BMP9诱导成骨分化过程中，随着培养时间的增加， miR-21在三株细胞中表达升高，3天后表达又会降低。在HMSC传代过程中，miR-21表达有升高。MiR-21可以增强BMP9诱导的ALP活性和钙盐沉积。MiR-21可以升高p-Smad1/5和Runx2的表达。生物信息学分析得出，Smad7为miR-21在BMP9诱导成骨分化中的潜在靶基因。双荧光素酶活性报告实验得出，miR-21可以直接靶向Smad7。
　　结论：BMP9使miR-21表达升高，miR-21可以协同BMP9促进早中期间充质干细胞成骨。而且，miR-21协同BMP9的成骨作用可能是通过靶向Smad7而发挥的。

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前言

第一部分MiR-21对BMP9诱导的间充质干细胞成骨分化的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

第二部分MiR-21协同BMP9对间充质干细胞成骨分化机制研究

1材料与方法

2结果

3讨论

参考文献

全文总结

文献综述: MicroRNA 在调控骨形态和维持骨骼内稳态的研究进展

致谢

攻读学位期间发表的学术论文