MiR-125b在肺结核患儿外周血单个核细胞的水平与体外培养巨噬细胞生物性行为的关系

摘要

第一部分：肺结核患儿和正常儿童外周血单个核细胞的miR-125b及其靶基因RAF1的表达检测
　　目的：分别检测肺结核患儿和正常儿童外周血单个核细胞中miR-125b水平，及靶基因RAF1的mRNA和蛋白水平。
　　方法：分别分离出已收集血液标本中外周血单个核细胞。利用荧光定量PCR检测miR-125b的表达及其RAF1的mRNA水平；利用蛋白免疫印记技术检测RAF1的蛋白水平。
　　结果：
　　1.相对于正常儿童，肺结核患儿外周血单个核细胞中miR-125b的表达下调；
　　2.相对于正常儿童，肺结核患儿外周血单个核细胞中RAF1的mRNA和蛋白水平都升高。
　　结论：肺结核患儿外周血单个核细胞中miR-125b表达下调，其靶基因RAF1表达升高；miR-125b靶向调控RAF1可能参与儿童结核免疫反应机制。
　　第二部分：miR-125b与体外培养巨噬细胞生物学行为关系的研究
　　目的：在THP-1巨噬细胞中，检测miR-125b是否调控RAF1的表达；并观察miR-125b对THP-1巨噬细胞中细胞凋亡和细胞活力的调节。
　　方法：THP-1巨噬细胞分为四组，分别为miR-mimic组、NC-mimic组、miR-inhibitor组及NC-inhibitor组，利用Lipofectamine TM RNAiMIX分别转染miR-125b模拟物（ miR-125b mimic）、阴性对照模拟物（NC-mimic）、miR-125b抑制物（miR-125b inhibitor）以及阴性对照抑制物（NC-inhibitor），转染后，孵育箱中共培养48h；利用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测THP-1巨噬细胞中RAF1表达，利用异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶（annexinⅤ-FITC/PI）双染色结合流式细胞术检测THP-1巨噬细胞的细胞凋亡，CCK-8法检测巨噬细胞的细胞活力。
　　结果：
　　1，在THP-1巨噬细胞中，miR-mimic组，相比较其对照组NC-mimic组，即miR-125b高表达时，RAF1表达下调；相比较其对照组NC-inhibitor组，miR-inhibitor组，即miR-125b表达被抑制时，RAF1表达上调。
　　2，在THP-1巨噬细胞中，相对于NC-mimic组，miR-mimic组，高表达miR-125b,促进细胞凋亡，细胞活力降低；相对于NC-inhibitor组,miR-inhibitor组，miR-125b表达被抑制时，抑制巨噬细胞凋亡，细胞活力升高。
　　结论：在THP-1巨噬细胞中存在miR-125b对靶基因RAF1的调控；miR-125b的表达升高，促进巨噬细胞凋亡，降低细胞活力；miR-125b的表达被抑制时，抑制细胞凋亡，提高细胞活力。

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前言

第一部分：肺结核患儿和正常儿童外周血单个核细胞中miR-125b及其靶基因RAF1的表达检测

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第二部分：miR-125b与体外培养巨噬细胞生物学行为关系的研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

参考文献

全文总结

文献综述:结核分枝杆菌感染与宿主噬菌细胞凋亡

致谢

攻读硕士期间发表论文