蛙皮素受体激活蛋白对脂多糖诱导的人气道上皮细胞株黏液高分泌的影响

摘要

目的：
　　探讨蛙皮素受体激活蛋白（BRAP）对脂多糖（LPS）诱导的气道黏液高分泌的影响及相关作用机制。
　　方法：
　　体外培养人气道上皮 HBE16细胞，给予LPS刺激，构建气道黏液高分泌模型，转染已构建好的 pEGFP-N1-BRAP，以空质粒载体作为对照，以ROS清除剂DMTU、ERK抑制剂U0126为干预因素。实验设空白对照组、LPS刺激组、LPS+pEGFP-N1-BRAP组、LPS+pEGFP-N1组、DMTU+LPS组、DMTU+LPS+pEGFP-N1-BRAP组、 DMTU+LPS+pEGFP-N1组、 U0126+LPS组、U0126+LPS+pEGFP-N1-BRAP组、U0126+LPS+pEGFP-N1组。MTT法检测细胞活性；RT-PCR法检测黏蛋白（MUC）5AC转录水平；ELISA法检测MUC5AC、IL-1β和IL-6蛋白水平；Western blot法检测 BRAP、p-IΚ Bα、p-ERK、p-p38MAPK蛋白水平；测定活性氧（ROS）含量；激光共聚焦法检测MUC5AC蛋白表达水平。
　　结果：
　　（1）给予LPS刺激后，细胞MUC5ACmRNA及蛋白水平明显增高，ROS含量和炎症因子IL-1β、IL-6的表达量也明显增加,同时伴有p-ERK、p-p38MAPK和p-IΚ Bα蛋白表达增高（P值均＜0.01）；（2）细胞过表达 BRAP后，MUC5ACmRNA及蛋白水平、ROS含量、炎症因子（IL-1β、IL-6）表达量和p-ERK及p-IΚ Bα蛋白水平均明显降低(P值均＜0.01)；（3）与U0126+LPS组和空质粒对照处理组相比，U0126+LPS+pEGFP-N1-BRAP组细胞MUC5AC转录及蛋白水平降低（P＜0.05），同时p-ERK和p-IΚ B蛋白表达也降低（P＜0.01）。（4）在 DMTU+LPS+pEGFP-N1-BRAP组，MUC5AC转录及蛋白水平较DMTU+LPS组和空质粒对照处理组显著降低(P＜0.05)，ROS含量降低（P＜0.01），p-ERK及p-IΚ Bα蛋白水平呈同样的降低趋势（P＜0.01）。
　　结论:
　　BRAP过表达可以通过抑制 ROS/ERK/NF-ΚB信号通路，降低LPS诱导的气道黏蛋白MUC5AC高分泌。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

1材料与方法

1.1材料

1.1.1细胞株

1.1.2主要试剂

1.1.3主要仪器与设备

1.2方法

1.2.1细胞培养

1.2.2细胞转染

1.2.3细胞处理及分组

1.2.4 MTT法检测细胞增殖活力

1.2.5 Western blotting

1.2.6 ELISA法检测MUC5AC蛋白含量

1.2.7 EILSA法检测IL-1β、IL-6的表达

1.2.8 RT-PCR法检测MUC5AC mRNA含量

1.2.9 ROS检测

1.2.10激光共聚焦显微镜检测并观察胞质内MUC5AC的含量

1.3统计学处理

2结果

2.1各处理因素对细胞活性的影响

2.2转染重组BRAP质粒后BRAP的表达

2.3 BRAP过表达对气道黏液高分泌的影响

2.3.1 BRAP过表达对MUC5AC转录及蛋白水平的影响

2.3.2激光共聚焦观察BRAP过表达对细胞内MUC5AC表达的影响

2.3.3 BRAP过表达对IL-1β、IL-6表达的影响

2.3.4 BRAP过表达对ROS生成的影响

2.3.5 BRAP过表达对p-ERK和p-p38MAPK的影响

2.3.6 BRAP过表达对p-IΚBα蛋白表达的影响

2.4 ROS/ERK/NF-ΚB在BRAP过表达调控的气道黏液高分泌中的作用

2.4.1 ERK在BRAP过表达调控LPS诱导的MUC5AC高分泌中的作用

2.4.2 ROS在BRAP过表达调控LPS诱导的MUC5AC高分泌中的作用

3讨论

全文结论

参考文献

文献综述：气道黏液高分泌的机制研究进展

致谢

硕士期间发表的论文