基底硬度对肝细胞和肝癌细胞迁移行为影响的比较研究

摘要

目的:通过比较分析不同硬度基底膜上肝细胞与肝癌细胞的迁移特征及其骨架构象和相关调节分子活性，探索肿瘤细胞迁移行为变化的成因，加深对肿瘤细胞迁移本质特征的认识。
　　方法:运用细胞形态学观察，图像分析软件等手段，分别对不同硬度基底上肝癌细胞，肝细胞迁移净距离、迁移速率、均方位移（Mean-squaredDisplacement,MSD）、随机运动频率（RandomMotilityCoefficient,D）、转向角和方向持续性（DirectionalPersistence,D/T）等参数进行定量分析；通过免疫荧光、酶谱等实验技术对不同硬度基底上细胞骨架变化及MMPs表达进行检测。
　　结果:不同硬度基底上HCCLM3和L02细胞的均方位移趋势一致，相对于极软（500Pa）和极硬（glass）基底，HCCLM3和L02细胞在较软基底（4000Pa）上具有较高的迁移速率和迁移净距离，且L02细胞对运动方向的维持能力较HCCLM3细胞高；加入40μg/mLMMPs抑制剂GM6001后，HCCLM3细胞的迁移速率、迁移净距离和对运动方向的维持能力一定程度的降低，L02细胞的迁移速率、迁移净距离和对运动方向的维持能力则显著降低；三维胶原基质中，HCCLM3细胞穿透基底膜的个数分别显著多于L02细胞穿透基底膜的个数；加入40μg/mLMMPs抑制剂GM6001后，HCCLM3细胞穿透基底膜的个数显著增加，而L02细胞穿透基底膜的个数显著减少。
　　结论:二维培养环境中，基底硬度对细胞迁移速率存在双向影响，L02细胞因有较高的方向持续能力而表现出高的迁移效率；三维胶原基质中，HCCLM3细胞释放出的阿米巴迁移行为是其具备更大侵袭能力的基础。

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英文缩写词表

1 绪 论

1.1 国内外研究现状

1.2细胞行为对基底硬度的依赖

1.3 问题的提出及验证性实验设计

1.4 研究意义

1.5 技术路线

2 硬度可控体外培养模型的建立

2.1 引言

2.2 实验试剂和仪器设备

2.3 实验方法

2.4 实验结果

2.5 讨论

3 基底硬度对肝细胞和肝癌细胞迁移特征的影响

3.1 引言

3.2 实验材料、试剂和仪器设备

3.3 实验方法

3.4 实验结果及分析

3.5 讨论

4 结论及展望

4.1 主要研究工作及结论

4.2 后续研究工作与展望

致谢

参考文献

附 录