蛴螬高致病力绿僵菌菌株的鉴定筛选与新制剂的田间应用技术研究

摘要

金龟甲类害虫幼虫，俗称蛴螬，是一类重要的地下害虫，也是迄今为止研究认为防治较为困难的害虫之一。蛴螬类害虫主要是危害作物的地下营养器官，并具有一定的隐蔽性。花生是我国重要的油料作物和粮食作物，具有重要的经济价值。但是近年来，蛴螬类害虫在我国山东、河南等花生作物主产区的危害却呈现逐年加重的趋势，加上化学农药的大量使用，不仅污染了土壤和环境而且严重的降低了花生的产量和品质。金龟子绿僵菌是一类重要的生防真菌，在生产上已得到广泛应用，全世界约有200多种昆虫能被绿僵菌的不同菌株感染致死。绿僵菌对地下害虫的防治潜力研究也已经得到了许多生防专家的重视。
　　本研究从山东日照、青岛两地的花生生产示范大田采集得到天然罹病的花生蛴螬僵虫中，分离得到两株绿僵菌菌株，分别编号为CQM132和CQM135。对菌株的分类地位进行了鉴定，并在室内测定了两株菌株对花生蛴螬的致病力。2009-2010年4～9月在山东省日照市三庄镇千亩无公害花生生产基地设置随机区组小区进行田间药剂试验，采用金龟子绿僵菌CQMa128微粒剂和乳粉剂分别在花生播种期和幼果期对田间花生蛴螬的防治效果和生物多样性的影响进行测试与评价。室内对适宜于防治地下害虫花生蛴螬的绿僵菌复配制剂进行了初步研究。主要研究结果如下：
　　①对两株菌株的ITS1-5.8SrDNA-ITS2区域进行扩增比对，并结合菌株的培养形态特征，参考绿僵菌复合种最新分类文献[75]，，并结合菌株的生物学培养形态特征，鉴定结果表明菌株CQM132和CQM135均属于金龟子绿僵菌（Metarhiziumanisopliae）。
　　②室内生物测定表明，菌株CQM132和CQM135对花生蛴螬（铜绿丽金龟和暗黑腮金龟幼虫）均具有较强的毒力。菌株CQM132的高浓度孢悬液（1.1×107孢子/ml–1.1×108孢子/ml）对两种金龟幼虫的的累计死亡率均达到85％以上，致死中时LT50≤7.58d。菌株CQM135的高浓度孢悬液（1.1×107孢子/ml–1.1×108孢子/ml）对两种金龟幼虫的的累计死亡率均达到90%以上，致死中时LT50≤6.85d。相比而言，菌株CQM135对两种金龟幼虫的致病力略优于菌株CQM132，在花生田间具有很好的应用前景。
　　③在春花生播种期施用10亿孢子/克金龟子绿僵菌CQMa128缓释性微粒剂（最适剂量375kg/hm2），施药后30-40d,平均校正防效达到75.58%～80.03%。同期调查生防区花生地周边的主要蛴螬天敌-钩土蜂未见对其有明显不良影响。
　　④在春花生幼果期施用100亿孢子/克金龟子绿僵菌CQMa128乳粉剂（最适剂量7.5kg/hm2），施药后15-20d的平均校正防效达到77.59%～86.46%。在高剂量绿僵菌制剂处理区中田间平均保果率最高达到85.76%～87.13%，花生果荚鲜重平均最高增产量达到832.5～916.4kg/hm2，与化学农药相当，控害保产效果显著。同期调查生防区花生地周边的主要蛴螬天敌-钩土蜂未见对其有明显不良影响。
　　⑤绿僵菌CQMa128和CQM135的纯孢粉与高效低毒化学农药高效氯氰菊酯、吡虫啉和毒死蜱具有很好的兼容性。室内生测表明，绿僵菌CQMa128和CQM135与三种高效低毒化学杀虫剂的最优复配比例均在1%–1.5%的范围内。

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目录

1 绪论

1.1 研究的目的和意义

1.2 国内外研究现状

1.3立题依据和研究目标

1.4 研究内容和技术路线

1.5 本研究创新之处

2 绿僵菌菌株的分离鉴定

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3 结果和分析

2.4 本章小结

3 绿僵菌菌株对花生蛴螬的致病力

3.1 实验材料

3.2 实验方法

3.3 结果和分析

3.4 本章小结

4 绿僵菌CQMa128微粒剂对花生蛴螬的田间防控试验

4.1 材料与方法

4.2 结果和分析

4.3 本章小结

5 绿僵菌CQMa128乳粉剂对花生蛴螬的田间防控试验

5.1 材料与方法

5.2 结果和分析

5.3 本章小结

6 蛴螬高致病力绿僵菌复配制剂的研究

6.1 实验材料

6.2 实验方法

6.3 结果和分析

6.4 本章小结

7 讨论

7.1 绿僵菌菌株的分离鉴定

7.2 绿僵菌菌株对花生蛴螬的致病力

7.3 绿僵菌CQMa128微粒剂对花生蛴螬的田间防控试验

7.4 绿僵菌CQMa128乳粉剂对花生蛴螬的田间防控试验

7.5 蛴螬高致病力绿僵菌复配制剂的研究

8 结论及后续工作建议

8.1 主要研究结论

8.2 后续工作建议

致谢

参考文献

附 录