(E)-3-(3,5-二羟基-4-异丙基苯基)丙烯酸(NI221)治疗炎症性皮肤病的抗炎活性及初步机制研究

摘要

炎症性皮肤病是天然免疫系统的异常应答，各种炎症性细胞因子及其靶细胞（角质形成细胞）介导的炎症性疾病。目前，临床上用于治疗炎症性皮肤病的药物主要有：糖皮质激素类、大环内酯类以及部分非甾体抗炎药等。然而，长期外用这些药物会导致皮肤萎缩、毛细血管扩张，青光眼，还可能增加淋巴瘤和皮肤癌的风险。近年来，炎症性皮肤病患病率呈逐年增高的趋势且致病机理复杂、病因不清，寻找新的非激素类且毒副作用小的化合物用于治疗炎症性皮肤病仍是药学研究者关注的焦点。大量研究表明，自然界众多的植物和微生物体内含有丰富的天然酚类化合物，因其具有广谱的生理活性，如：抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒和免疫调节作用而越来越受到关注。本论文基于咖啡酸(Caffeic acid，CA)和白藜芦醇(Resveratrol)衍生物的结构和生理活性，以及5-（2-苯基乙烯基）-2-异丙基-1,3-苯二酚前期的一系列研究为基础，合成筛选出了两个具有潜在抗炎作用的化合物（E）-3-（3,5-二羟基-4-异丙基苯基）丙烯酸（NI221）和（E）-苯乙基-3-（3,5-二羟基-4-异丙基苯基）丙烯酸酯（NI222），并对它们的结构及纯度进行了分析鉴定。通过二甲苯、佛波酯（12-O-tetradecanoyl-phorbol-13-acetate，TPA）和花生四烯酸（Arachidonic acid，AA）诱导的小鼠耳组织炎症动物模型，客观地评价了NI221和NI222的抗炎活性。此外，通过TPA诱导的小鼠耳组织炎症动物模型和体外活性实验，对NI221的抗炎机理进行了研究。
　　1）通过优化各步反应条件对化合物NI221和NI222的合成路线进行探讨，利用波谱分析技术对产物NI221和NI222的结构进行鉴定，并通过熔点测定分析化合物的纯度。结果表明，该方法合成的化合物NI221和NI222产率和纯度均较高，可以直接用于后续药效学实验。
　　2）采用二甲苯、TPA和AA诱导的小鼠耳肿胀模型，评价了NI221和NI222的抗炎作用。从小鼠耳肿胀厚度和相关组织形态学分析结果表明：NI221对各个模型的炎症都有抑制作用，且存在明显的剂量依赖关系；在单次 TPA模型中 NI221（1.6mg/ear抑制率为65.6％，0.8mg/ear抑制率为41.7%）抑制水肿的能力比 CA（1.6mg/ear抑制率为14.4%，0.8mg/ear抑制率为9.5%）强；而NI222仅对二甲苯诱导的炎症有轻微地抑制。
　　3）NI221抗炎机制的研究。本论文以TPA诱导的小鼠耳肿胀模型为研究对象，通过测定小鼠耳组织匀浆中髓过氧化物酶（MPO）的活性，评价中性粒细胞的聚集情况；采用酶联免疫吸附法（ELISA）和实时聚合酶链式反应（RT-PCR）分析炎症细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌及其转录水平。实验结果表明，NI221能有效地降低MPO的活性，抑制炎症细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌以及下调它们的mRNA水平。推测NI221是通过抑制中性粒细胞的聚集和炎症细胞因子的分泌发挥抗炎作用。
　　4）研究NI221对5-酯氧化酶（5-LOX）活性的抑制。本研究结合抗炎部分不同致炎物质诱导小鼠耳肿胀模型的机理和 NI221对各个模型炎症的抑制情况，推测 NI221能有效地抑制5-LOX的活性。实验通过酶免疫分析试剂盒（Enzyme Immunoassay Kit，EIA）考察不同浓度的NI221对健康人血中LTB4的抑制情况。结果发现NI221能显著降低人血中LTB4的含量，说明NI221为5-LOX抑制剂。

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1 绪 论

1.1 炎症性皮肤病及其临床治疗用药情况

1.2 天然多酚类及衍生物的研究进展

1.3 研究内容

2 NI221、NI222的合成及鉴定

2.1引言

2.2 实验材料

2.3 实验方法

2.4 实验结果与讨论

2.5 结论

3 NI221、NI222抗炎作用的研究

3.1 引言

3.2 实验材料

3.3 实验方法

3.4 实验结果与讨论

3.5 结论

4 NI221抗炎机制的研究

4.1 引言

4.2 实验材料

4.3 实验方法

4.4 实验结果与讨论

4.5 结论

5 总结与展望

5.1 主要结论

5.2 后续研究工作的展望

致谢

参考文献

附录

A 研究生期间研究成果

B 小鼠耳肿胀模型

C 资助项目