平滑肌祖细胞转化成气道平滑肌细胞参与哮喘气道重构的研究

摘要

哮喘是常见和多发的呼吸系统疾病之一。哮喘的主要病理特征为肺气道组织的重构，而气道重构的主要原因是哮喘发生时气道平滑肌细胞的过度增殖。但目前还不完全清楚过度增加的气道平滑肌细胞的来源，现在研究表明一方面是原来的气道平滑肌细胞在炎症因子等的诱导下过度增殖产生的，另一方面是粘膜下层的成纤维细胞转变成的成肌纤维细胞诱导增殖产生的。但是是否还存在其他来源目前还不得而知，故寻找和发现可能的气道平滑肌细胞增殖来源并对其相关机理展开研究将会是哮喘研究中的一个新的研究课题和方向，同时也为进一步研究探索新的治疗慢性哮喘的方法和途径提供新的依据。
　　许多研究者近来发现新生的血管平滑肌细胞不仅来源于平滑肌细胞，至少有一部分也来源于循环平滑肌祖细胞（smooth muscle progenitor cells, SPCs），这可以给我们一些研究的提示：哮喘中气道平滑肌细胞的过度增殖也可能存在有循环平滑肌祖细胞的参与，本文就此假设展开了验证研究。
　　将从SD大鼠腹腔主动脉获取的外周血密度梯度离心以获得外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cell），然后将其在40ng/ml血小板来源的生长因子-BB（platelet-derived growth factor-BB, PDGF-BB）的含20％胎牛血清培养条件下诱导分化平滑肌祖细胞，并测定向分化平滑肌祖细胞过程中细胞增殖能力的改变。复制SD大鼠哮喘动物模型，鉴定哮喘气道平滑肌细胞中是否存在平滑肌祖细胞的CD34标记的阳性表达，并估算平滑肌祖细胞在哮喘气道重构中所参与到的比例。本研究对于哮喘中气道重构病理机制的理解及发展相应的防治方法具有很重要的意义。
　　本文主要实验结论如下：
　　①获取SD大鼠腹主动脉外周血，通过密度梯度离心法获取外周血单核细胞，将细胞接种于添加40ng/ml PDGF-BB的20%胎牛血清的DMEM高糖培养液、胶原Ⅰ包被的培养瓶中进行培养，经过鉴定平滑肌细胞标记α-SMA及干细胞CD34标记的阳性表达，成功的获得诱导成的平滑肌祖细胞。
　　②MTT比色法测定单核细胞在 PDGF-BB的诱导下分化成平滑肌祖细胞的过程中细胞的增殖活力，20d时细胞的增殖能力已有显著性增加(p<0.05)。
　　③成功复制SD大鼠哮喘动物模型，并获取哮喘模型和正常组中的气道平滑肌细胞，经免疫荧光法鉴定细胞爬片的CD34阳性表达细胞的比例为3.24±2.43%，而正常组中 CD34阳性表达比例为0.69±1.18%，说明哮喘组中气道平滑肌祖细胞的比例高于正常组，通过以上研究初步证实了平滑肌祖细胞参与了哮喘气道重构。

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1绪 论

1.1 引言

1.2 哮喘及其研究现状

1.3 平滑肌祖细胞研究现状

1.4 平滑肌祖细胞与哮喘气道重构存在的联系

1.5 本文的研究工作

2 外周血单核细胞的提取与诱导培养与鉴定

2.1 引言

2.2材料、仪器与试剂

2.3 试验方法

2.4 实验结果

2.5 讨论与小结

3 哮喘模型的制备及平滑肌祖细胞含量的鉴定

3.1 引言

3.2 材料、仪器与试剂

3.3 试验方法

3.4 试验结果

3.5 讨论与小结

4 结论与展望

4.1 本文的主要结论

4.2 后续工作与展望

致谢

参考文献

附录