脑脊液双向凝胶电泳方法的建立及帕金森病脑脊液蛋白质组学的初步研究

摘要

帕金森病(PD)是一种以中脑黑质多巴胺神经元变性、缺失，以静止性震颤、运动迟缓、肌强直、姿势步态异常为主要特征的神经系统变性疾病。目前认为可能由多种基因突变、环境毒素、年龄老化共同作用的结果。但引起PD的确切病因和发病机理迄今仍不清楚。随着蛋白质组学的发展，有关神经系统的脑脊液蛋白质组学也渐渐展开，但帕金森病脑脊液研究较少，而且脑脊液为高盐低蛋白体液，其中高丰度蛋白(白蛋白，IgG等)占据绝大部分，使具有重要生理作用的低丰度蛋白检出下降，分辨率低。如何改善脑脊液样品处理，提高分辨率和重复性，建立稳定的脑脊液双向凝胶电泳技术是尚待解决的问题。 目的：探索去除脑脊液高丰度蛋白的方法，建立双向凝胶电泳(2-DE)适宜的实验方案；比较PD患者和对照组脑脊液2-DE图谱，寻找有意义的差异蛋白。为脑脊液蛋白质组学提供技术平台，并为探索帕金森病发病机制提供新的思路。 方法： 1．建立稳定的脑脊液双向凝胶电泳体系 ①用Oasis HLB柱层析分馏将脑脊液中高丰度蛋白去除，过滤液冻干，丙酮沉淀去盐浓缩，提取脑脊液中低丰度蛋白。②以固相pH梯度等电聚焦(IPG-IEF)为第一向，垂直平板十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)为第二向进行2-DE；③用银染法对电泳后的凝胶染色，采集凝胶图像并进行图像分析。 2．根据已建立的实验方法进行帕金森患者脑脊液蛋白质组学研究，寻找差异点，并行质谱鉴定。 结论： 1、运用Oasis HLB过滤柱层析分馏可以有效地去除脑脊液中高丰度蛋白质，使低丰度蛋白检出率增加，建立了稳定的脑脊液双向凝胶电泳体系； 2、PD患者与对照组脑脊液蛋白质表达有明显差异，部分蛋白质在PD患者脑脊液中上调或下调，这些差异蛋白质可能与帕金森病发病机制有关。

目录

第一部分脑脊液双向凝胶电泳方法的建立

前 言

材料与方法

结 果

讨 论

结 论

第二部分帕金森病脑脊液蛋白质组学的初步探索

前 言

材料与方法

结 果

讨 论

结 论

小 结

参考文献

综 述1帕金森病发病机制的研究进展

综 述2蛋白质组学及帕金森病蛋白质组学的研究进展

致 谢