川芎嗪对PDGF诱导大鼠气道平滑肌细胞增殖的抑制作用及分子机制

摘要

目的：气道平滑肌细胞异常增殖是哮喘气道重塑的重要病理特征。研究气道平滑肌细胞的增殖机理对支气管哮喘及气道重塑的逆转和预防有着重要意义。川芎嗪是从传统中药川芎的干燥根茎提取的一种活性生物碱单体。目前已经广泛应用于临床呼吸道疾病，特别是哮喘的治疗。本实验通过建立大鼠原代ASMC的增殖模型，观察川芎嗪对ASMC增殖的影响。从细胞学和分子生物学水平研究川芎嗪治疗哮喘的作用机制，并探讨其可能的信号转导通路及药物作用靶点。为临床应用川芎嗪治疗哮喘提供实验依据。 方法： 1．采用酶消化联合组织块贴壁法培养原代大鼠气道平滑肌细胞。 2．建立增殖模型：采用PDGF诱导ASMC增殖。MTT法检测A490的吸光度值，以观察PDGF诱导ASMC增殖作用以及川芎嗪对PDGF诱导的细胞增殖的抑制作用。 3．流式细胞仪分析ASMC经PI染色DNA含量以观察细胞周期。 4．Western Blotting检测ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达水平。 5．Hoechst33342染色检测细胞凋亡。 结果： 1．改进的培养方法成功培养出可传代的原代大鼠ASMC。 2．随着PDGF浓度的升高（2～80 ng/ml），MTT比色法A490值呈上升趋势。与对照组相比较，20 ng/ml和80 ng/ml PDGF-BB组有统计学意义。相同浓度PDGF-BB各时间点相比较，20 ng/ml和80 ng/ml、组有统计学意义。 3．川芎嗪作用12h后50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L组抑制率较对照组（PDGF刺激组）显著升高；与对照组相比48h后各浓度组抑制率均升高。 4．川芎嗪处理24h后，与对照组比较，50μmol/L、100μmo/L和200μmol/L组的ASMC G0/G1期比率明显增加，S期细胞比率降低，且CV<8。 5．川芎嗪与PDGF（20 ng/ml）共同处理30min和60 min后p-ERK1/2蛋白表达水平显著降低。 6．Hoechst33342观察到50μmol/L、200μmol/L和400μmol/L川芎嗪组中强荧光细胞比例随川芎嗪剂量增大而增多，川芎嗪处理的细胞出现了核内多个不均一蓝染现象。 结论： 1．应用改良组织块消化法，培养和建立了原代大鼠ASMC。 2．应用PDGF-BB成功诱导ASMC增殖，建立细胞增殖模型。 3．TMP可抑制PDGF-BB诱导的ASMC增殖，使细胞周期停滞于G0/G1期。并存在浓度依赖关系。 4．TMP抑制PDGF-BB诱导的ASMC增殖的效应可能与TMP抑制MAPK中ERK1/2的信号通路磷酸化有关。 5．大剂量TMP抑制PDGF-BB诱导的ASMC增殖与TMP诱导细胞凋亡有关。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:中英文对照词表

声明

前 言

一、气道重塑与哮喘

二、气道平滑肌细胞与哮喘

三、气道平滑肌细胞增殖的相关分子机制

四、川芎嗪的药理作用

五、应用前景

第一部分PDGF-BB诱导大鼠气道平滑肌细胞增殖模型的建立和鉴定

材料和方法

结果

讨论

第二部分川芎嗪对ASMC增殖的抑制作用及相关分子机制

材料方法

结果

讨论

全文结论

参考文献

综述 气道平滑肌细胞增殖相关信号通路研究进展

致谢