巨噬细胞移动抑制因子对小鼠血管外膜成纤维细胞增殖、迁移及表型转换的影响及雷公藤内酯醇的抑制作用

摘要

目的：经皮冠状动脉介入治疗（PCI）已广泛应用于冠心病治疗，但术后再狭窄影响了其有效应用。巨噬细胞移动抑制因子（MIF）是一种多效性的促炎症细胞因子。研究发现，MIF可影响众多类型细胞的增殖和迁移作用，也可引起NIH 3T3细胞的表型转换。雷公藤为中国传统中药，有效单体成分为雷公藤内酯醇(TP)，据研究具有免疫抑制和抗炎抗肿瘤等作用。新近的研究表明，TP也有促进多种细胞的凋亡作用。以往观点认为血管损伤后再狭窄的发病机制是血管中膜平滑肌细胞向内膜迁移，造成内膜增厚及管腔狭窄，而近来研究发现，血管外膜的成纤维细胞增殖、迁移和表型转换，继而合成分泌细胞外基质（ECM）导致损伤动脉外膜瘫痕形成、弹性回缩，引发血管外膜再塑形也是PCI术后再狭窄的重要机制之一。因此，本研究拟于体外培养小鼠血管外膜成纤维细胞（MAFB），研究MIF及TP在MAFB增殖、迁移及表型转换作用，探讨MIF在血管再狭窄中可能的参与机制及TP可能的作用机制。 方法：⑴采用胶原酶Ⅰ型消化法培养MAFB，细胞鉴定采用波形蛋白免疫组化染色。⑵采用CCK-8法检测经MIF刺激处理的MAFB的增殖情况，于剌激的0、6、12、24、48、60、72小时检测细胞的生长情况。⑶采用transwell培养皿，检测MIF刺激处理的MAFB的迁移情况，并在显微镜下计数细胞迁移数。⑷表型转换试验采用三个检测指标，分别是α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、波形蛋白(Vimentin)、细胞培养上清液中羟脯氨酸含量测定。前两者采用western blot法检测，后者采用羟脯氨酸消化法检测，再换算成胶原的含量。⑸采用CCK-8法检测经TP刺激处理的MAFB的增殖情况，于剌激的0、6、12、24、48、60、72小时检测细胞的生长情况。⑹以TP处理MAFB，再经Annexin V-FITC及Propidium Iodide双重染色，行流式细胞仪检测细胞凋亡情况。⑺MIF作用下的MAFB增殖、迁移、表型转换试验，在实验中，设立MIF50μg/L组（a）、MIF50μg/L+TP12.5μg/L组(b)、MIF50μg/L+TP25μg/L组(c)、TP12.5μg/L组(d)、TP25μg/L组(e)及空白组(f)共6小组。 结果：①采用胶原酶Ⅰ消化法可成功培养出MAFB。②MIF呈剂量依赖性（0-100μg/L）促进MAFB的增殖、迁移、胶原合成作用。③MIF呈剂量依赖性（0-50μg/L）促进MAFB的表型转换作用，但MIF的表型转换作用在50μg/L时已达到平台期，100μg/L MIF较50μg/L MIF对MAFB的表型转换作用稍弱，但统计学上无差异（P>0.05）。④TP（0-50μg/L）对MAFB增殖作用没有明显的影响，TP(100μg/L)时可抑制MAFB的增殖。⑤TP（0-25μg/L）对MAFB凋亡没有明显的影响，TP(50μg/L)时可引起MAFB的明显凋亡。⑥以TP（0-25μg/L）及MIF50μg/L联合处理MAFB，发现TP可以剂量依赖性方式抑制MIF增殖、迁移及表型转换作用。⑦以TP（0-25μg/L）单独刺激，对MAFB的增殖、迁移及表型转换作用无影响（P>0.05）。 结论：MIF呈剂量依赖性促进MAFB的增殖、迁移及表型转换作用，MIF对MAFB的表型转换作用于MIF浓度为50μg/L时达到平台期；而小剂量的TP可以剂量依赖性抑制MIF的上述作用。

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综述巨噬细胞移动抑制因子与血管外膜成纤维细胞表型转换

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