还少丹对雌、雄老龄大鼠抗衰老作用的探究

摘要

中医学因其独特的理论体系，在抗衰老领域占重要位置。很多学者开始对中医抗衰老古方进行研究和重新利用。但中药复方的抗氧化、抗衰老机制研究仍然欠深刻，有很多未知需要探讨。本文以复方中药“还少丹”为试验药物，分别在细胞和动物水平探究还少丹抗氧化、抗衰老的作用。
　　本研究主要内容包括：⑴细胞水平：取4月龄SPF级(Specific pathogen Free, SPF) SD大鼠(Sprague Dawley)14只(雌、雄各半)，制备大鼠血清，即载还少丹血清（载药血清）和大鼠空白血清；载药血清、空白血清、胎牛血清以及含有维生素C(VC)的载药血清和胎牛血清分别用于配制相应的培养基，用于体外培养成骨细胞(Rat osteoblast, ROBs)；分别检测不同培养环境中ROBs的增殖、周期及mTOR(Mammalian target of rapamyein)的表达量，以期探讨还少丹对ROBs的作用。⑵动物水平：取20月龄SPF级SD大鼠28只(雌、雄各半)，随机分为雄性对照组(MC）、雄性还少丹组(MH)、雌性对照组(FC)、雌性还少丹组(FH)；给还少丹组灌胃还少丹水溶液，对照组灌胃等量的无菌水，每天灌胃一次，每7天称重一次，并记录；第60天，一次灌两倍剂量的还少丹，末次灌胃1.5-2h后，腹腔注射戊巴比妥钠，等深度麻醉时：从心脏取血制备血清，检测血清中超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase SOD）的活性和丙二醛（Malondialdehyde MDA）的含量；依次打开胸腔、腹腔和颅腔，依次取出心、肝、脾、肺、肾、胃、胰、脑等，迅速放入冰生理盐水中清洗，用滤纸吸干生理盐水后称重、记录，以大鼠脏器重(g)/体重(100 g)，计算各脏器系数；分别称取大鼠肝脏和大脑0.1 g（5份），按10％（W:V）加入生理盐水，超声破碎肝和脑组织，制备10%组织匀浆，然后离心并取上清检测肝脏及脑中SOD的活性和MDA的含量；把心、肝、脾、肾、胃、脑组织置于4%甲醛中固定，做石蜡切片并HE染色(hematoxylin-eosin staining)，光学显微镜下观察脏器形态。⑶实验结果表明：在细胞水平，还少丹有促进ROBs增殖、增加mTOR表达量、调控细胞周期的作用。在动物水平，还少丹对老龄SD大鼠的体重没有影响；还少丹能显著提高雄性的脏器系数而对雌性脏器系数作用不明显；还少丹显著增强了雄性血清、肝脏及脑中SOD的活性并同时降低MDA的含量；但对于雌性，SOD的活性在血清、肝脏和脑匀浆中均没有显著变化，也仅在血清中检测到MDA含量的显著降低；从组织切片染色的结果可以看出，还少丹有保持脏器处于年轻形态的趋势。

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主要缩略词

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1 绪 论

1.1 问题的提出

1.2 国内外研究现状

1.3 研究思路及主要研究内容

1.4 本文的创新点

2 大鼠颅骨成骨细胞的分离、纯化、培养及鉴定

2.1 引言

2.2 实验部分

2.3 实验结果

2.4 讨论

2.5 本章小结

3 载药血清的制备

3.1 引言

3.2 实验部分

3.3 实验结果

3.4 讨论

3.5 本章小结

4 载药血清对SD大鼠乳鼠成骨细胞的生物学效应

4.1 引言

4.2 实验部分

4.3 实验结果

4.4 讨论

4.5 本章小结

5 还少丹对老龄SD大鼠抗衰老作用的研究

5.1 引言

5.2 实验部分

5.3 实验结果

5.4 讨论

5.5 本章小结

6 结论及后续工作建议

6.1 结论

6.2 未来工作的展望

致谢

参考文献

附录

A．作者在攻读学位期间发表的论文：

B．作者在攻读学位期间参加的科研项目：