腺苷蛋氨酸诱导肝脏尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶活性的机制研究

摘要

新生儿高胆红素血症（neonatal hyperbilirubinemia，NHB）是新生儿时期的常见病，可引起多器官系统损害。尽快降低血清胆红素水平是治疗新生儿高胆红素血症的关键。目前临床常用的治疗有光疗、换血疗法、药物治疗三个方面的措施，三者各有利弊，故寻找一种能安全、经济、有效地降低血清胆红素水平的药物对治疗新生儿高胆红素血症具有突出意义。尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶（UDP-glucuronosyltransferase，UGT）是胆红素结合的关键酶，可使脂溶性的非结合胆红素变成水溶性的结合胆红素而排出体外。
　　腺苷蛋氨酸（S-adenosyl-L-methionine，SAMe）是体内内源性物质，参与体内多种重要的生化反应，可作为底物参与合成半胱氨酸、牛磺酸、谷胱苷肽、辅酶A等重要物质，并作为基因供体或酶性诱导剂在人体组织三大代谢过程中起到转甲基、转硫基和丙氨化(多聚胺合成)作用。该药应用于临床已有多年，其适应证主要针对肝内胆汁郁积、肝炎高胆红素血症等黄疸，能有效降低血清结合胆红素水平，近年来国内有报道称SAMe辅助治疗新生儿高胆红素血症有一定疗效。因此，我们从分子生物学的角度，分析SAMe对人胎肝细胞（LO2）的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶mRNA表达和蛋白的生成、活性的影响。
　　第一部分：
　　腺苷蛋氨酸诱导肝脏尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶mRNA表达的研究
　　目的：
　　分别给予不同浓度、时间的SAMe干预LO2细胞，比较受干预的LO2细胞在尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶mRNA水平的变化，探讨SAMe对LO2细胞UGT的mRNA表达水平的影响及最佳的干预条件。
　　方法：
　　体外培养LO2细胞，待细胞约70％铺满培养板底部，进行分组：⑴SAMe处理组，根据预实验结果加入SAMe使其终浓度分别为1、0.5、0.1mmol/L；⑵阳性对照组，予以肝酶诱导剂，终浓度为2mmol/L苯巴比妥＋5mmol/L尼可刹米；⑶阴性对照组，不作加药处理。加药培养24h、48h、72h、92h后收集细胞。通过荧光定量PCR检测各组的mRNA水平。
　　结果：
　　LO2细胞的UGT1A1 mRNA经一定浓度 SAMe诱导后增加，其中以浓度为0.5mmol/L组最为明显，该组经SAMe诱导24h后细胞的UGT1A1 mRNA开始增高（49.18±10.16，P<0.05），48h达到高峰（130.69±9.23，P<0.05），72h后明显下降（28.25±9.42，P<0.05），此后未见明显变化；与肝酶诱导剂组比较，其诱导LO2细胞生成UGT1A1 mRNA的量更多，作用时间更长（P<0.05）。
　　结论：
　　适当浓度的SAMe对LO2细胞的UGT1A1的mRNA表达有诱导生成作用，表达量及时效均比肝酶诱导剂好。
　　第二部分：
　　腺苷蛋氨酸诱导肝脏尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶蛋白表达的研究
　　目的：
　　分别给予不同浓度、时间的SAMe干预LO2细胞，比较受干预的LO2细胞在UGT蛋白表达及分泌水平的变化，探讨SAMe对LO2细胞的UGT的蛋白表达、分泌水平的影响及最佳的干预条件。
　　方法：
　　体外培养LO2细胞，待细胞约70%铺满培养皿底部，进行分组：⑴SAMe处理组，根据预实验结果加入SAMe使其终浓度分别为1、0.5、0.1mmol/L；⑵阳性对照组，终浓度为2mmol/L苯巴比妥＋5mmol/L尼可刹米；⑶阴性对照组，不加药处理。加药培养24h、48h、72h、92h后收集细胞。通过western blot及ELISA检测各组的UGT1A1蛋白表达、分泌水平。
　　结果：
　　LO2细胞的UGT1A1蛋白经 SAMe诱导后合成和分泌增加，其中以浓度为0.5mmol/L组最为明显，该组经SAMe诱导24h后细胞的UGT1A1蛋白合成和分泌开始增高（49.18±10.16或526.18±5.21，P<0.05），48h达到高峰（130.69±9.23或1278.22±9.38，P<0.05），72h后明显下降（28.25±9.42或296.62±6.42，P<0.05），此后未见明显变化；与肝酶诱导剂组比较，其诱导LO2细胞合成和分泌更多的UGT1A1蛋白，作用时间更长（P<0.05）。
　　结论：
　　适当浓度的SAMe对LO2细胞的UGT1A1蛋白的表达有诱导生成作用，表达量及时效均比肝酶诱导剂好。

目录

中英文词汇对照表

中文摘要

英文摘要

前 言

第一部分：腺苷蛋氨酸诱导肝脏尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶mRNA表达的研究

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 统计学处理

结 果

1 人胎肝细胞（LO2细胞）培养结果

2 SAMe对LO2细胞UGT1A1的mRNA表达量的影响

讨 论

第二部分：腺苷蛋氨酸诱导肝脏尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶蛋白表达的研究

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 统计学处理

结 果

1 SAMe对LO2细胞UGT1A1蛋白表达量的影响

讨 论

全文总结

参考文献

综 述

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