碳源代谢阻遏子BbCre1影响球孢白僵菌生长、产孢和毒力

摘要

本文通过超量表达和反义抑制球孢白僵菌的BbCrel基因，分析了转化子在不同碳源条件下的生长、产孢、水解酶基因的表达以及对毒力的影响。主要结果如下： 1． BbCrel 基因影响球孢白僵菌对不同碳源的利用。在木糖和乙醇作为唯一碳源的条件下，反义抑制BbCrel 的转化子生长速率和产孢量明显高于野生型菌株，而超量表达BbCrel的转化子的菌落生长速率和产孢量则明显低于野生菌株；在葡萄糖作为唯一碳源条件下，各菌株之间差异不显著。 2．球孢白僵菌降解昆虫体壁Prl类蛋白酶基因的表达受到BbCrel，的调控。在葡萄糖作为唯一碳源的条件下，反义抑制BbCrel的转化子表达降解昆虫体壁Prl类蛋白酶的活性明显升高，而超量表达BbCrel的转化子的Prl类蛋白酶活性明显低于野生菌株。 3． BbCrel 基因是影响球孢白僵菌毒力的重要因子。生物测定结果表明，反义抑制BbCrdl明显提高了球孢白僵菌毒力，而超量表达BbCrel的转化子的毒力则显著降低。在1×10<'7>个/ml孢子浓度下，而反义抑制BbCrel的转化子对桃蚜的致死中时比野生菌株缩短了10-11小时，而超量表达BbCrel的转化子对桃蚜的致死中时比野生型菌株延长了6-8小时。

目录

文摘

英文文摘

第一章文献综述

第二章引言

2.1研究目的和意义

2.2技术路线

第三章材料与方法

3.1材料

3.1.1供试菌株

3.1.2供试昆虫

3.1.3质粒载体

3.1.4主要化学试剂

3.1.5主要仪器设备

3.1.6主要培养基

3.1.7主要缓冲液配方

3.2方法

3.2.1基因克隆

3.2.2序列与系统进化分析

3.2.3菌株培养

3.2.4载体构建

3.2.5球孢白僵菌遗传转化

3.2.6真菌DNA和RNA的提取

3.2.7 Southern杂交

3.2.8转化子分子验证

3.2.9 Real-Time PCR

3.2.10 Pr1类蛋白酶活性的测定

3.2.11生物学特性分析

3.2.12生物测定

第四章结果与分析

4.1球孢白僵菌碳源阻遏因子BbCrel基因的克隆

4.2 BbCrel的序列分析

4.3 BbCrel基因的Southern杂交结果

4.4 BbCrel在球孢白僵菌中的表达受葡萄糖抑制

4.5 BbCrel超量表达载体和反义抑制载体的验证

4.6 BbCrel超量表达和反义抑制转化子的筛选

4.7 BbCrel影响球孢白僵菌对碳源的利用

4.7.1 BbCrel影响球孢白僵菌的生长速率

4.7.2 BbCrel影响球孢白僵菌的产孢量

4.8 BbCrel影响球孢白僵菌水解酶的表达

4.9 BbCrel影响球孢白僵菌对桃蚜的毒力

第五章讨论

5.1 BbCrel在球孢白僵菌中的表达受葡萄糖的抑制

5.2 BbCrel影响球孢白僵菌对碳源的利用

5.3 BbCrel影响球孢白僵菌中Prl类蛋白酶的表达

5.4 BbCrel影响球孢白僵菌对桃蚜的毒力

第六章结论

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表论文情况