鱼腥草素钠对鸡BSA抗体及灭活菌苗免疫鸭的影响

摘要

鱼腥草素(Houttuyfonate)是鱼腥草(俗称折耳根)挥发油中抗病微生物的有效成分，化学结构为癸酰乙醛。鱼腥草素与亚硫酸氢钠的加成物为鱼腥草素钠(Sodium houttuyfonate，SH)。王大勇等发现，SH与牛血清白蛋白(Bovin serum albumin，BSA)或红细胞混合注射后，小白鼠血清。IgC、IgM类抗体效价明显增加，提出SH具有免疫佐剂效应。研究表明，SH可增强小白鼠巨噬细胞吞噬功能，增强巨噬细胞呼吸爆发，增加细胞内游离钙离子浓度及T细胞分泌白细胞介素-2。 SH对禽类体液免疫是否有增强作用?未见文献报道。本文报道SH对鸡、鸭抗体产生及菌苗接种后的攻毒保护试验的影响研究结果。 1、SH对BSA免疫鸡后抗体产生具有增强效应。 以BSA为免疫原，比较10碳原子SH(SH-C10)与白油(Mineral oil，MO)佐剂免疫雏鸡后，对BSA特异性抗体产生的影响。间接ELISA检测结果是，二次免疫后，SH-C10组和MO组间抗体效价极显著高于BSA组(P＜0.01)，SH-C10组和MO组间抗体效价无显著差异(P＞0.05)。试验结果表明，SH对BSA免疫鸡后的抗体增强效应与MO佐剂相当。 2、SH对鸭疫里默氏杆菌(Rimerella anatipestifer，RA)灭活菌苗免疫小鸭后攻毒保护率具有增强效应。 以灭活的鸭疫里默氏杆菌(Rimerella anatipestifer,RA)为抗原，免疫接种雏鸭，通过攻毒试验检测SH对细菌性颗粒抗原的免疫佐剂效应。试验选择医学临床上广泛应用的新鱼腥草素钠(十二酰乙醛亚硫酸钠，SH-C12)为试验品，以AF株强毒RA为试验菌种制备灭活菌苗(Iactivated RA，iRA)。采用正交试验设计iRA与SH-Ci2配合比率、免疫次数和首免日龄。结果是：iRA与SH-C12混合物一次接种，4日龄和6日龄雏鸭在免疫后11～15天攻毒，相对保护率(Relative protection rate，RP)均低于40％。相反，iRA与SH-C12混合物于2、4、6和8日龄雏鸭首免，间隔5～7天后进行二次(强化)免疫，然后在16～19日龄攻毒，iRA与SH-C12的不同配合组中，有5个组的RP大于60％，其中甚至有一个组发病率死亡率为0，RP达到了100％。试验结果显示，iRA中加入SH-C12，二次免疫接种雏鸭表现出良好的免疫佐剂效应。 在获得上述结果后，我们选择iRA与SH-Ci2配合较佳组与MO佐剂进行对比试验。4日龄首免，11日龄二免，16日龄攻毒。结果是，攻毒对照组死亡率为53.3％(8/15)，SH-Cl2和MO组发病率均为0，RP均为100％(15/15)。比较试验鸭在攻毒7天后的增重，MO组平均增重数值上小于健康对照组，SH-C12组平均增重数值上大于健康对照组，统计学检验，三组间不存在显著差异。 3、SH在体外试验中对鸭红细胞具有溶血作用。 在试验二中发现，SH-C12对照组(仅注射SH-C12溶液)死亡率为81.8％(9/11)，高于AF株强毒RA攻毒对照组死亡率(63.6％，7/11)。为解释这一现象，按照《中华人民共和国药典》(下简称药典)2000版二部质量标准要求。以十二酰乙醛亚硫酸钠(SH-C12)标准品为参照，对试验品SH-c10、SH-C12进行质量检测。结果是，三氯化铁反应、碘反应、二硝基苯肼反应以及紫外光谱最火吸收峰测定等检测项，SH-C10样品均符合《药典》要求，含量为97.25％；SH-C12样品中三氯化铁反应(检测羟基)项为阴性，其余各项符合《药典》要求，含量为94.23％。 据报道，SH可引起人红细胞溶血，但SH是否引起鸭红细胞(Red blood cell，RBC)溶血，未见报道。为此，我们采集健康鸭血液，进行体外溶血试验，采用分光光度法测定溶血程度，结果是，包括标准品在内，三种SH样品，浓度为40μg/mL～200μg/mL时可致鸭RBC发生明显溶血，溶血率达到96.0％。显微镜观察，加入有SH溶液的鸭RBC涂片中，出现大量的无胞浆，只有胞核的RBC残片。SH溶液中含有吐温-80，相同浓度的吐温．80也可以引起鸭RBC溶解，但溶血率最高为30.1％。试验表明，SH溶液引起鸭RBC严重溶解，这可能是SH单独使用时引起鸭对RA强毒攻击敏感性增高的原因。 综上研究认为，SH对鸡、鸭免疫有免疫佐剂效应，可以进行开发研究。但SH有效剂量、SH引起鸭RBC溶血等副作用值得高度重视和深入研究。

目录

文摘

英文文摘

声明

第1文献综述

1.1鱼腥草研究进展

1.2鱼腥草素钠的研究进展

1.3中药免疫增强剂的研究进展

第2章绪论

2.1研究的目的和意义

2.2研究的范围和内容

第3章鱼腥草素钠对BSA免疫雏鸡后抗体产生的影响

3.1材料

3.2方法

3.3结果

3.4讨论

第4章鱼腥草素钠对鸭疫里默氏杆菌疫苗免疫雏鸭的影响

4.1材料

4.2方法

4.3结果

4.4讨论

第5章鱼腥草素钠的鉴定

5.1材料

5.2方法

3.4 讨论

第6章鱼腥草素钠对鸭红细胞的影响

6.1材料

6.2方法

6.3结果

6.4讨论

第7章结论

参考文献

附录

致谢

发表文章及参加课题一览表