酪氨酸激酶抑制剂PTK787抗急性髓性白血病的作用研究

摘要

【目的】 1．观察急性髓性白血病模型小鼠外周血清血管内皮生长因子水平的变化，探讨血管内皮生长因子在急性髓性白血病发病机制中的作用。 2．观察急性髓性白血病模型小鼠外周血血管内皮生长因子受体-2 mRNA 表达的变化，探讨血管内皮生长因子受体-2 在急性髓性白血病发病机制中的作用。 3．观察PTK787对血管内皮生长因子、血管内皮生长因子受体-2 mRNA 表达的影响，探讨PTK787抗急性髓性白血病的作用机制。 4．观察不同剂量PTK787对血管内皮生长因子、血管内皮生长因子受体-2 表达水平的影响，探讨PTK787抗急性髓性白血病的剂量依赖性。 【方法】 1．HL-60 细胞培养将HL-60细胞悬浮于10％胎牛血清的RPMI 1640培养液中，于37℃、5％CO<,2>、饱和湿度的培养箱中培养，隔天换液，一周传代约2～3次。 2．急性髓性白血病动物模型建立 6 周龄严重联合免疫缺陷小鼠40只，雌性，于无特定病原体条件下饲养。随机分为5组，分别为：正常组(不建立模型，不给予PTK787治疗)、患病组(建立模型，不给予PTK787治疗)、50mg/kgPTK787治疗组、100mg/kg PTK787 治疗组、200mg/kg PTK787 治疗组。收集对数生长期HL-60细胞，患病组及治疗组均以腹腔注射方式接种细胞 1×10<'7>/鼠。 3．给药及采集标本建立模型后第1天，各治疗组小鼠通过灌胃方式按照体重每天给予相应剂量的PTK787，正常组和患病组小鼠通过灌胃方式每天给予生理盐水代替。于不同时间点进行断尾采血，采血时间为：建立模型前4天、建立模型第7天、第14天、第21天、第28天、第34天。 4．小鼠外周血清血管内皮生长因子水平的检测用于血管内皮生长因子检测所需要的血标本，3500rpm离心10分钟，收集上清液，保存在-20℃。动物实验结束后使用酶联免疫吸附测定检测不同组别小鼠在不同时间血清血管内皮生长因子的水平。 5．小鼠外周血血管内皮生长因子受体-2 mRNA 水平的检测用于血管内皮生长因子受体-2 mRNA 检测所需要的血标本，用淋巴细胞分离液分离单个核细胞，收集单个核细胞后，抽提总 RNA，反转录聚合酶链式反应特异性扩增血管内皮生长因子受体-2 mRNA，琼脂糖凝胶电泳扩增产物，采用成像系统分析血管内皮生长因子受体-2 mRNA 水平。 【结果】 1．急性髓性白血病严重联合免疫缺陷小鼠模型建立的成功率为100％。 2．与正常组相比，患病组小鼠的血管内皮生长因子和血管内皮生长因子受体-2mRNA 水平明显升高，且随着病程的进展而逐渐升高。 3．与患病组相比，PTK787治疗组小鼠血管内皮生长因子和血管内皮生长因子受体-2 mRNA 表达水平明显下降。 4．与正常组相比，PTK787 治疗组小鼠的血管内皮生长因子和血管内皮生长因子受体-2 mRNA 的水平有统计学差异。 5．3个剂量PTK787治疗组小鼠血管内皮生长因子和血管内皮生长因子受体-2mRNA 表达水平无统计学差异。 【结论】 1．通过把HL-60 细胞移植入严重联合免疫缺陷小鼠体内是建立急性髓性白血病动物模型的有效方法。 2．急性髓性白血病模型鼠血管内皮生长因子和血管内皮生长因子受体-2mRNA表达水平明显升高，提示血管内皮生长因子和血管内皮生长因子受体-2参与了急性髓性白血病的发病机制。 3．PTK787 治疗急性髓性白血病的作用机制与抑制血管内皮生长因子和血管内皮生长因子受体-2表达有关。 4．PTK787抗急性髓性白血病在一定剂量范围内不存在剂量依赖性。 5．靶向治疗为急性髓性白血病的临床治疗提供了新策略。

目录

声明

1前言

1.1研究背景

1.2研究目的

1.3研究内容

2急性髓性白血病动物模型的建立

2.1材料与方法

2.2结果

2.3讨论

3 VEGF在急性髓性白血病的表达

3.1材料

3.2方法

3.3结果

3.4讨论

4 VEGFR-2在急性髓性白血病的表达

4.1材料与方法

4.2方法

4.2结果

4.3讨论

5 PTK787对VEGF、VEGFR-2表达的影响

5.1材料与方法

5.2结果

5.3讨论

附图

小结

参考文献

文献综述：新型酷氨酸激酶抑制剂PTK787/ZK222584的研究进展

致谢

附录