自噬在槲皮素诱导人膀胱癌BIU-87细胞凋亡中的作用

摘要

[目的]
　　 自噬是真核细胞特有的普遍生命现象，广泛参与多种生理和病理过程。近年来，自噬在肿瘤的发生、发展及治疗的研究中受到重视。本课题旨在观察槲皮素诱导人膀胱癌BIU-87细胞凋亡过程中的自噬现象，并初步探讨自噬在此过程中的作用。
　　 [方法]
　　 光学显微镜下观察不同浓度槲皮素(0、100、200、300、400、500、600、700、800μmol/L)给药24h后的BIU-87细胞形态的变化；用不同浓度的槲皮素(0、50、75、100、125、150、200μmol/L)处理人膀胱癌BIU-87细胞，经过24h、48h和72h后，采用MTT法测定槲皮素对人膀胱癌BIU-87细胞增殖的抑制作用；应用MDC荧光染色、Hochest33258染色分别观察槲皮素(200μmol/L)给药后不同时间点上BIU-87细胞的自噬和凋亡现象；检测乳酸脱氧酶(LDH)漏出率以观察用自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)阻断自噬后槲皮素(200μmol/L)的细胞毒作用的变化，并利用流式细胞仪研究阻断自噬对槲皮素诱导的细胞凋亡率的影响。
　　 [结果]
　　 (1)光镜下BIU-87细胞形态随槲皮素浓度变化而呈现明显的梯度受损改变。
　　 (2)槲皮素对BIU-87细胞增殖有显著的抑制作用，且此作用呈明显的时间、剂量依赖性，与未加药组相比，各浓度组的增殖抑制率差异有统计学意义(P<0.05)。同时，相同时间不同浓度组之间的增殖抑制率相比差异有统计学意义(P<0.05)。相同浓度不同时间的增殖抑制率也存在统计学上的显著差异(P<0.05)。
　　 (3)槲皮素可以诱导BIU-87细胞发生自噬和凋亡。给药1.5h观察到细胞内出现少量染成荧光颗粒的自噬囊泡，6h和12h明显增多；而凋亡核变化出现于给药12h，24h时较为明显，可见大量凋亡小体。
　　 (4)在槲皮素给药前后分别阻断自噬，BIU-87细胞的LDH漏出率显著增高，亦即槲皮素对BIU-87细胞的细胞毒性作用均增强，与对照组和单纯槲皮素给药组相比，差异有统计学意义(P<0.05)，并且阻断自噬后BIU-87细胞的凋亡率明显增高。
　　 [结论]
　　 槲皮素能明显抑制BIU-87细胞的生长增殖，并诱导其先后发生自噬和凋亡，由槲皮素诱导的自噬在早期能够明显保护BIU-87细胞，延缓槲皮素诱导的细胞凋亡，减少因槲皮素导致的细胞死亡。