维甲酸诱导的腭裂小鼠Msx1基因启动子区DNA甲基化改变

摘要

目的：⑴研究维甲酸诱导的腭裂小鼠腭突粘膜组织和间充质组织中Msx1基因启动子区DNA甲基化改变。⑵研究维甲酸诱导的腭裂小鼠腭突粘膜组织和间充质组织在诱导前后的Msx1基因表达差异。⑶探讨Msx1基因启动子区DNA甲基化对Msx1基因表达的影响以及在腭裂发病中的可能作用。
　　 方法：将16只怀孕小鼠随机分为实验组和对照组，每组8只。实验组在孕10天时予全反式维甲酸(100mg/kg)溶于0.2ml植物油灌胃，对照组予0.2ml植物油灌胃。孕18天时剖宫取出小鼠胚胎，观察有无腭裂畸形并记录。采集胚鼠腭突粘膜组织及间充质组织，应用重亚硫酸氢盐限制性内切酶法(COBRA)检测Msx1基因启动子区DNA甲基化情况。应用半定量RT-PCR法检测胚鼠腭突粘膜与间充质组织Msx1基因表达情况。
　　 结果：①实验组剖宫共得到95只胚鼠，其中有82只是腭裂胚鼠，另外11只胚鼠胚囊处于被吸收的状态，只有2只发育出了正常的腭部。对照组8只孕鼠共得到101只正常胚鼠，无畸形胚鼠产生。②COBRA结果:实验组腭间充质组织中Msx1启动子区BstUI酶切位点DNA甲基化水平比对照组高(P＜0.05);对照组中腭间充质甲基化水平比腭粘膜组织中要低(P＜0.05);实验组与对照组腭粘膜组织中DNA甲基化水平无明显差异(P＞0.05)。③半定量RT-PCR结果:实验组腭间充质Msx1基因表达水平低于对照组腭间充质(P＜0.05);实验组腭粘膜与对照组腭粘膜的表达水平无明显差异(P＞0.05);对照组中腭粘膜组织基因表达水平低于间充质组织(P＜0.05)。④应用Pearson直线相关分析示四种组织中Msx1基因DNA甲基化与mRNA表达都呈负性相关。其中实验组腭粘膜（r=-0.465）;实验组腭间充质（r=-0.772）;对照组腭粘膜（r=-0.821）;对照组腭间充质（r=-0.726）。上述所有的结果都具有统计学意义(P＜0.05)。
　　 结论：⑴在小鼠孕10天时一次性灌胃10mg/kg全反式维甲酸可构建小鼠腭裂模型。⑵维甲酸改变了腭间充质组织Msx1基因启动子区的甲基化水平。⑶维甲酸减少了腭间充质组织中Msx1基因的表达。⑷Msx1基因启动子区DNA甲基化水平可能影响基因的正常表达。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 研究背景

1．2 研究目的

1．3 研究内容

2 材料与方法

2．1 材料

2．2 方法

3 结果

4 讨论

5 小结

参考文献

综述 唇腭裂发病机制的研究进展

致谢

附录：缩写词中英文对照表