柚皮苷下调p38MAPK表达对糖尿病心肌病大鼠心肌的保护作用

摘要

[目的]：
　　观察柚皮苷干预对糖尿病心肌病(Diabetic Cardiomyopathy，DCM)大鼠心肌p38丝裂原活化蛋白激酶(p38-mitogen-activated protein kinases，p38MAPK)表达及其对心肌形态及超微结构的影响，探讨p38MAPK在DCM中的可能作用，柚皮苷是否通过下调p38MAPK表达对DCM大鼠的心肌起保护作用。
　　[方法]：
　　将60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC)10只和模型组(M)50只，NC组一直予普通饲料喂养，M组采用高糖高脂饲料喂养6周，第6周末一次性小剂量(30mg/kg)链脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)腹腔注射行糖尿病(Diabetes MeUitus，DM)模型造模，M组造模成功后继续予高糖高脂饲料喂养6周行DCM造模。DM模型造模成功后，M组随机分为模型对照组(MC)、柚皮苷低剂量组(NRG L)、柚皮苷中剂量组(NRG M)、柚皮苷高剂量组(NRGH)、SB203580组(SB)。NRG L组、NRGM组、NRG H组分别予柚皮苷(20、40、80 mg·kg-1·d-1)灌胃，SB组予p38MAPK通路抑制剂SB203580(5mg·kg-1·d-1)腹腔注射，NC组、MC组予生理盐水灌胃。各组大鼠每2周称体重，检测鼠尾术梢血糖，观察一般状态。干预6周后各组动物经心脏取血后处死，取心脏测定心重指数，用酶联免疫法(Enzyme-Linked ImmunoSorbentAssay，ELISA)检测血浆脑钠钛(Brain natriuretic peptide，BNP)，免疫印迹法(Western Blot，WB)检测心肌组织总p38丝裂原活化蛋白激酶(total p38mitogen-activated protein kinase，t-p38MAPK)和磷酸化p38丝裂原活蛋白激酶(phosphorylation of p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38MAPK)的表达情况，光镜观察心肌细胞病理学及电子显微镜观察心肌细胞超微结构。
　　[结果]：
　　1.实验处理6周后，NRG L组、NRG M组、NRG H组的血糖较MC组下降，有统计学差异(P＜0.01)，SB组血糖无明显变化。
　　2.NC组心重指数最小，与MC组比较有统计学差异（P＜0.05），柚皮苷各组、SB组不同程度使心重指数降低，与MC组比较有统计学差异(P＜0.05)，其中NRG H组降低效果最好，与NC组比较无统计学差异（P＞0.05)。
　　3.NRG L组、NRG M组、NRG H组、SB组的BNP较MC组明显下降，有统计学差异(P＜0.05)。
　　4.WB法检测各组心肌t-p38MAPK表达水平没有明显改变，NC组具有一定水平的p-p38MAPK表达，MC组心肌p-p38MAPK表达水平明显升高，与NC组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）;与MC组比较，NRG L组心肌p-p38MAPK表达水平有下降，差异具有统计学意义（P＜0.05）;与MC组比较，NRG M组、NRG H组、SB组心肌p-p38MAPK表达水平明显下降，差异具有统计学意义(P＜0.01);与SB组比较，NRG M、NRG H组心肌p-p38MAPK表达水平相当，无统计学意义(P＞0.05)，而NRG L组心肌p-p38MAPK表达有统计学意义(P＜0.05)。
　　5.在光镜下，与NC组比较，MC组心肌细胞排列极不规则、紊乱、扭曲，形态不均匀，细胞核固缩，甚至裂解消失，可见大部分心肌细胞有不程度变性、肥大，有的甚至坏死，呈灶性溶解，间质内可见大量胶原纤维增生及炎性细胞浸润，毛细血管壁明显增厚。NRG L组部分心肌细胞改善，部分心肌细胞肥大、变性，毛细血管壁轻度增厚，间质内可见少量胶原纤维增生及散在少量炎性细胞浸润。NRG M组、SB组心肌细胞改善较好，未见炎症细胞浸润。NRG H组改善最好，与正常心肌细胞大致相同。
　　6.在电镜下，与NC组比较，MC组心肌细胞结构紊乱，明显肿胀，肌节结构模糊不清，肌浆网扩张，闰盘扭曲模糊断裂。线粒体肿胀、破裂，间质有大量增生的胶原纤维。NRG L组可见部分心肌细胞稍改善，部分心肌结构紊乱、肿胀，肌节结构显示欠清，闰盘稍模糊，曲度稍增大，线粒体肿胀，间质可见少量增生的胶原纤维。NRG M组、SB组的心肌结构较清晰，心肌细胞排列较规则，细胞核和闰盘结构大致同NC组，线粒体个别轻度肿胀。NRG H组心肌结构、线粒体大致同正常。
　　[结论]：
　　本实验通过对大鼠DCM模型用柚皮苷进行干预观察，证实柚皮苷可有效改善DCM心脏重构及心功能，而且呈剂量依赖性。同时，使用柚皮苷干预后，p-p38MAPK表达下调，与心脏重构、心功能改善密切相关，故推论柚皮苷可能通过下调p38MAPK的表达对DCM大鼠心肌起保护作用。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 研究背景

1．2 研究目的

1．3 研究内容

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．2 实验方法

3 结果

4 讨论

5 小结

参考文献

综述 p38 MAPK在糖尿病心肌病中的作用研究进展

致谢

附录

在读期间的科研情况