转录共激活因子TAZ在胶质瘤细胞增殖中的作用及其机制研究

摘要

神经胶质瘤是中枢神经系统最常见的和致命原发性肿瘤，约占中枢神经系统恶性肿瘤的80%。根据生长速度和对邻近脑组织的浸润程度，胶质瘤可分为低级别（世界卫生组织（WHO）I级和II级），以及高级别（WHO III级和IV级）[3]。即使经过目前最有效的治疗方法如手术、放疗、联合化疗等治疗后，高级别胶质瘤病人的中位生存期仍不容乐观（14.6个月）。这可能是由于胶质瘤的具体特性，如高度浸润性和缺乏明确的边界等引起的。此外，血脑屏障（BBB）的物理和化学约束也是胶质瘤综合治疗的主要障碍。因此，研究恶性胶质瘤形成的分子机制，寻找恶性胶质瘤新的药物靶点是迫切需要的。转录共激活因子TAZ是哺乳动物Hippo通路下游最主要的效应因子之一，包含400个氨基酸，其结构由一个TEAD结合区域（TB），一个WW区域，一个卷曲螺旋结构，一个转录激活区域，以及C端的一个PDZ结合模序组成。TAZ参与其下游靶因子的转录共激活过程，调控细胞的增殖、凋亡以及迁移等多种生理过程。近年来研究发现，在胃癌、非小细胞肺癌、乳腺癌及神经母细胞瘤等多种恶性肿瘤中TAZ的表达均高于正常癌旁组织。肿瘤细胞的恶性增殖往往和细胞周期进程的改变密切相关，EGFR信号通路在此过程中发挥着至关重要的作用。EGFR属于 ErbB受体家族，在哺乳动物上皮细胞、成纤维细胞、胶质细胞、角质细胞等细胞表面均有广泛分布，EGFR及其下游信号通路对细胞的生长、增殖和分化等过程至关重要。EGFR一经磷酸化激活，其下游的PI3K/AKT和Ras-ERK通路随即被激活，进而加速细胞周期进程。研究发现，TAZ能够通过促进EGFR配体双调蛋白（AREG）的表达，进而促进乳腺癌细胞MCF10A不依赖于生长因子（EGF）增殖。但是，TAZ对于胶质瘤细胞的增殖的影响的研究还尚未有报道。
　　本研究主要内容包括：⑴通过查询数据库及基因芯片检测TAZ与胶质瘤病人预后的关系，及TAZ在不同级别的胶质瘤中的表达情况，结果表明TAZ的表达情况与胶质瘤病人的预后密切相关，胶质瘤级别越高，TAZ的表达量越高。利用 Western blot技术检测TAZ在多种不同胶质瘤细胞系中的表达情况，结果显示 TAZ在 U251、LN229、U87、A172、U118及胶质瘤组织中均有较高的表达。⑵采用慢病毒介导的shRNA干扰技术和稳定质粒表达技术在U87和LN229两种胶质瘤细胞系中对 TAZ蛋白进行下调和上调，利用 MTT、Brdu技术检测两种细胞系的增殖情况，建立荷瘤小鼠模型和利用Soft Agar实验检测TAZ在体内及体外成瘤及自我更新能力的影响。结果显示细胞增殖实验结果表明，细胞的增殖率与TAZ的表达量呈正相关，TAZ下调后细胞的增殖受到抑制，在体内及体外成瘤及自我更新能力也受到相应的抑制，TAZ上调的结果恰好与此相反。⑶利用流式细胞仪检测TAZ对细胞周期的调控，采用Western blot技术检测相应蛋白的表达量结果显示TAZ下调的情况下细胞周期阻滞在G1期，相关周期蛋白CDK2和cyclin E2表达伴随其下调，TAZ上调的结果恰好与此相反。⑷采用Western blot技术检测EGFR/AKT/ERK信号通路的变化情况，最后利用EGFR信号通路抑制剂阻断由TAZ促进的细胞增殖检测胶质瘤细胞的增殖情况变化，结果显示下调TAZ后相关的EGFR信号通路受到相应的抑制，TAZ上调的结果恰好与此相反，EGFR信号通路抑制剂Eriotinib可以阻断由TAZ过表达引起的相关反应，从而初步确定了TAZ是通过EGFR信号通路调控胶质瘤细胞的增殖与迁移的。

目录

声明

第一章 文献综述

1.1 Hippo信号通路的发现与功能

1.2 TAZ和YAP结构与功能

1.3 Hippo信号通路与肿瘤的发生发展

1.4 YAP/TAZ作为开发抗癌药物的靶点

第二章 引言

2.1 研究背景及意义

2.2 主要内容和技术路线

第三章 TAZ对胶质瘤的影响及表达分析

3.1材料与仪器试剂

3.2 实验方法

3.3实验结果与分析

3.4讨论

第四章 TAZ对恶性胶质瘤细胞增殖及肿瘤形成能力的影响

4.1材料与仪器试剂

4.2实验方法

4.3实验结果与分析

4.4讨论

第五章 TAZ对胶质瘤细胞细胞周期的调控

5.1材料与仪器

5.2试验方法

5.3实验结果与分析

5.4讨论

第六章TAZ调控恶性胶质瘤细胞增殖的机制研究

6.1材料与仪器试剂

6.2实验方法

6.3实验结果与分析

6.4讨论

第七章 全文总结

7.1 TAZ与恶性胶质瘤的预后密切相关

7.2 TAZ与恶性胶质瘤细胞细胞增殖及肿瘤形成能力的影响

7.3 TAZ对恶性胶质瘤细胞周期的调控

7.4 EGFR/AKT/ERK是TAZ重要的下游效应通路

7.5 讨论

参考文献

缩略词表

硕士在读期间发表的文章及参研课题情况

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