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缩略语说明
摘 要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 活性天然产物的重要来源——真菌次级代谢产物
1.2 真菌活性天然产物的发现手段
1.2.1 真菌活性天然产物传统的发现手段
1.2.2 “沉默”基因簇相关天然产物发现策略
1.3 橘青霉次级代谢产物研究现状
1.4 真菌单模块非核糖体多肽合成酶研究进展
1.4.1 真菌天然产物分类
1.4.2 非核糖体肽合成酶
1.4.3 单模块非核糖体多肽合成产物研究
1.4.4 非核糖体肽类化合物的生物信息学分析
1.5 立题依据及主要技术路线
第二章 实验材料和方法
2.1 实验材料
2.1.1 菌株
2.1.2 质粒
2.1.3 所用引物
2.1.4 本课题主要用到的培养基及其配置方法
2.1.5 抗生素
2.1.6 实验试剂
2.1.7 主要仪器
2.2 实验方法
2.2.1 菌种的保藏
2.2.2 菌株的培养
2.2.3 质粒提取
2.2.4 基因组提取
2.2.5 全基因组序列的测定及次级代谢产物基因簇分析方法
2.2.6 胶回收
2.2.7 PCR产物纯化
2.2.8 酶切和连接
2.2.9 大肠杆菌转化及转化子验证
2.2.10 酵母菌转化及转化子验证
2.2.11 RNA的提取、纯化及质量检测
2.2.12 cDNA反转
2.2.13 RT-qPCR反应
2.2.14 原生质体转化
2.2.15 大肠感受态的制备
2.2.16 酵母感受态的制备
2.2.17 化合物的高效液相检测
2.2.18 化合物的分离与结构鉴定
第三章 实验结果与分析
3.1 橘青霉ATCC38065的全基因组测序及次级代谢基因簇分析
3.1.1 橘青霉ATCC38065的全基因组测序
3.1.2 橘青霉ATCC38065次级代谢产物生物合成基因簇分析
3.2 单模块非核糖体多肽合成酶(ATRR)分析
3.2.1 单模块非核糖体多肽合成酶(ATRR)的发现
3.2.2 单模块非核糖体多肽合成酶(ATRR) A结构域分析
3.2.3 单模块非核糖体多肽合成酶(ATRR) R结构域分析
3.3 橘青霉ATCC38065基于原生质体转化的遗传转化体系的建立
3.3.1 橘青霉ATCC38065抗性测试
3.3.2 不同细胞壁裂解酶制备橘青霉ATCC38065原生质体的效率
3.3.3 不同酶解时间制备橘青霉ATCC38065原生质体的效率
3.3.4 不同萌发时间制备橘青霉ATCC38065原生质体的效率
3.3.5 转化菌株的PCR分子鉴定
3.3.6 转化菌株的遗传稳定性分析
3.4单模块非核糖体多肽合成酶(ATRR)基因在橘青霉ATCC38065中的过表达研究
3.4.1 橘青霉ATCC38065过表达菌株的构建
3.4.2 橘青霉ATCC38065过表达株各基因表达量验证
3.4.3 P.citrinum OE::atrr产物的分离与鉴定
3.5 橘青霉ATCC38065单模块非核糖体多肽合成酶(ATRR)基因异源表达
3.5.1 异源表达质粒的构建
3.5.2 单模块非核糖体肽合成酶（ATRR）基因的异源表达
第四章 讨论
4.1 橘青霉ATCC38065基因组分析
4.2 橘青霉ATCC38065遗传转化体系的建立
4.3 橘青霉ATCC38065中单模块非核糖体多肽合成酶(ATRR)基因的研究
第五章 总结
5.1 实验结果小结
5.2 不足与展望
参考文献
硕士期间发表论文
致 谢
