声明
缩略语说明
第1章 综述
1.1真菌天然产物生物合成研究进展
1.2真菌聚酮化合物生物合成研究进展
1.3苔色酸及其衍生物生物合成研究进展
1.4二苯醚类化合物的研究进展
1.4.1化学合成二苯醚类化合物
1.4.2天然二苯醚类化合物
1.5 Diorcinol及其衍生物的研究进展
1.5 1 Diorcinol 及其衍生物的生物活性
1.5.2 Diorcinol及其衍生物的生物合成研究进展
1.6本课题的提出及研究意义
第2章 材料与方法
2.1实验材料
2.1.1菌株与质粒
2.1.3主要培养基和溶液的配制方法
2.2 实验方法
2.2.1Aspergillus nidulansFGSC A4的培养和菌体的保存
2.2.2Aspergillus nidulansFGSC A4RNA的提取及cDNA的合成
2.2.2 PCR体系
2.2.3目的基因片段及质粒的酶切和纯化
2.2.4重组质粒的构建
2.2.5感受态细胞的制备
2.2.6大肠杆菌系统表达和纯化重组蛋白
2.2.7A.nidulans(Δors-BGC strain)原生质体的制备
2.2.8体内生物转化
2.2.9 体外生化检测AN7909-TE突变株
2.2.10 化合物的分析检测
2.2.11 化合物的分离与结构鉴定
2.2.12 生物信息学分析
第3章 结果与分析
3.1 Doircinol生物合成基因簇的分析
3.2 Diorcinol生物合成途径的推测
3.3Aspergillus nidulansFGSC A4的cDNA的合成和目的基因片段的合成
3.4基因AN7910和AN7911功能的验证
3.4.1 AN7910和AN7911蛋白表达载体的构建
3.4.2 AN7910和AN7911蛋白的表达与纯化
3.4.3 AN7911催化苔色酸脱羧生成苔黑酚
3.4.4 AN7910不能催化苔黑酚二聚生成diorcinol
3.5基因AN7909功能的验证
3.5.1基因AN7909在E.coli BAP1中表达没有可溶性蛋白
3.5.2酵母系统中表达AN7909产生diorcinolic acid
3.5.3 Diorcinolic acid不是由S.cerevisiae BJ5464影响产生的
3.5.4构巢曲霉系统中过表达AN7909产生diorcinolic acid
3.5.5 AN7909的生物信息学分析
3.5.6 Diorcinolic acid的生成和AN7909 的两个ACP 结构域相关
3.5.7 Diorcinolic acid的生成和AN7909的TE结构域相关
3.6酵母系统中重构diorcinol的生物合成途径
3.6.1构建pYET-AN7910和pYEL-AN7911重组质粒
3.6.2 BJ-AN7909+AN7910,BJ-AN7909+AN7911和BJ-AN7909+AN7910+AN7911的代谢产物的分析检测
3.6.3化合物78，化合物80和化合物98的分离与结构鉴定
3.7基因AN7910功能的验证
3.7.1 AN7910的生物信息学分析
3.7.2 AN7910催化diorcinolic acid 脱羧生成C10-deoxy gerfelin
3.7.3 His68和Arg16是AN7910的氨基酸活性位点
3.8 AN7911催化C10-deoxy gerfelin脱羧生成diorcinol
3.9 Diorcinol生物合成途径的总结
第4章 总结与展望
4.1总结
4.2创新点
4.3展望
参考文献
附录 本课题所鉴定的化合物的核磁谱图
硕士期间发表论文及获奖情况
致谢
