c-fos和c-jun反义基因重组体转染对缺氧复合烧伤血清处理心肌细胞保护作用的研究

摘要

目的:探讨c-fos,c-jun反义基因重组体转染对缺氧复合烧伤血清处理心肌细胞的保护作用.方法:烧伤血清按照该研究所烧伤动物模型制备获得<'[1]>(98℃沸水烫伤造成30﹪Ⅲ°TBSA,6h后收集血清备用),采用含1﹪氧气的混和气体作为缺氧模型<'[2]>,按照分子克隆方法构建c-fos,c-jun反义基因重组体,用构建好的c-fos,c-jun反义基因重组体转染体外培养的Wistar大鼠乳鼠心肌细胞,然后加入烧伤血清培养,并且造成缺氧,采用光镜,电镜观察心肌细胞的形态学改变,用RT-PCR方法研究c-fos,c-jun mRNA在心肌细胞中的表达变化,用Western blot方法检测心肌细胞c-fos,c-jun蛋白,肌钙蛋白,细胞骨架β-微管蛋白(β-Tubulin β-Tub)的表达变化.结论:缺氧复合烧伤血清处理可诱导心肌细胞c-fos,c-jun表达显著增加,心功能重要指标β-Tubulin和肌钙蛋白的表达明显下降,造成心肌细胞损伤,转染c-fos,c-jun反义基因重组体后,c-fos,c-jun表达显著下降,β-Tubulin和肌钙蛋白的表达明显回升,心肌细胞形态结构损伤明显减轻,表明c-fos,c-jun反义基因重组体转染对缺氧复合烧伤血清处理心肌细胞具有保护作用.

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文摘

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c-fos和c-jun反义基因重组体转染对缺氧复合烧伤血清处理心肌细胞保护作用的研究

前 言

材料与方法

一、主要材料

二、方法

实验结果

一、c-fos-PcDNA3.1(+)和c-jun-PcDNA3.1(+)重组体的构建和鉴定

二、DNA测序结果

三、培养的Wistar大鼠乳鼠心肌细胞

四、心肌细胞光镜，电镜下细胞骨架形态学观察

五、c-fos mRNA RT-PCR结果

六、c-jun　ｍRNA RT-PCR结果

七、c-fos蛋白Westen blot结果分析

八、c-jun蛋白Westen blot结果分析

九、肌钙蛋白Westen blot结果分析

七、β-Tubulin Westen blot结果分析

讨 论

结 论

致谢

参考文献

附 录

文献综述缺血氧细胞c-fos和c-jun表达的研究进展

摘要

一、c-fos，c-jun

二、c-fos，c-jun在正常细胞中的表达

三、c-fos，c-jun与缺血缺氧细胞损伤及修复的关系

四、小结和展望

参考文献